丙酮酸磷酸双激酶PPDK试剂盒 光合系列 返回列表页

丙酮酸磷酸双激酶（PPDK)试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

丙酮酸磷酸双激酶PPDK试剂盒 光合系列

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

丙酮酸磷酸双激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1）是C4 途径和景天科酸代谢途径的限速酶，催化 ATP、丙酮酸和 Pi 经三步反应生成磷酸烯醇式丙酮酸。该酶主要存在于 C4 植物的叶绿体基质中，对光合功能具有重要调节作用。

测定原理：

PPDK 的逆向反应催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP 和PPi 生成丙酮酸、ATP 和Pi，乳酸脱氢酶进一步催化丙酮酸和NADH 生成乳酸和NAD⁺，在 340nm 测定NADH 减少速率，计算 PPDK 活性。

组成：

试剂三 ：液体 60μl×1 支，4℃保存；体积较少，若沾在管壁上，临用前可低速离心后使用。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样本的前处理：

按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤和加样表：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

工作液的配制：临用前取试剂二一瓶加入 25ml 试剂一和 12.5μl 试剂三，充分混匀，置于 37℃水浴 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

在 1ml 石英比色皿中加入 50μl 样本和 950μl 工作液，混匀，立即记录 340nm 处初始吸光值A1 和37℃反应 5min 后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

PPDK 活性计算：

按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

PPDK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

按样本鲜重计算

单位定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

PPDK（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=643×ΔA÷W

V 反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； V 样：加入样本体积，0.05ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g。

丙酮酸磷酸双激酶PPDK试剂盒 光合系列