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供货周期 | 现货 | 规格 | 100T |
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货号 | R23004 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业 |
主要用途 | 仅供科研专用 |
AO/EB双荧光染色试剂盒
产品货号:R23004
产品规格:100T
产品简介:
AO/EB双荧光染色试剂盒 细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TU NEL等标记片段化DNA方法,但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑,使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的。细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞,测定细胞代谢活性和形态学观察。这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的,因而不一定反映实际情况, MTT法是测定线粒体中*酶的活性,反映细胞数目的变化,其结果与细胞死亡的数目未必*一致。
Acridine Orange属于三环杂芳香燃料,可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料,AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测,AO与核酸结合方式主要有:1、插入性结合,AO嵌入核酸双链的碱基对之间,这种结合方式主要为AO与DNA的结合,其荧光发射峰为530nm,激发后呈绿色荧光;2、静电吸引,带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合,这种结合方式主要为AO与RNA的结合,其荧光发射峰为640nm,激发后呈红色荧光,少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此AO嵌合到双链DNA分子中显绿色,与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光;Ethidiu m Bro mide嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中,无碱基特异性,发红色荧光;AO可透过活细胞膜,EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。
产品组成:
产品名称 | 100T | 保存条件 |
试剂(A): AO Solution | 200μl | 4℃,避光 |
试剂(B): EB Solution | 200μl | 室温 |
试剂(C): AO/EB Dilution Buffer | 50ml | 4℃,避光 |
自备材料:
1. 荧光显微镜
2. PBS
3. 细胞计数板
4. 载玻片、盖玻片
操作步骤(仅供参考):
1. 收集细胞,用PBS清洗细胞1次,加入适量的PBS重悬细胞,计数并调节细胞浓度至(0.2~5)×106 /ml。
2. 配制AO/EB工作液:取适量的试剂(A)、试剂(B)、试剂(C),按照试剂(A):试剂(B):试剂(C)=1:1:8的比例稀配制成 AO/EB工作液。
3. 每25~50μ l细胞悬液中加入AO/EB工作液2μ l,混合均匀,试问孵育5~15min。
4. 取洁净载玻片,滴加上5~10μ l细胞悬液,轻轻盖上盖玻片。
5. 在荧光显微镜B域进行观察。
染色结果:
活细胞 绿色荧光
死细胞 橙色荧光
注意事项:
1. 用能通过活细胞膜与DNA结合后发蓝色荧光的Hoechst 33342和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光的Propidiu m Iodide对细胞进行双染的方法也比较常用。
2. 如有低温离心机进行离心效果更佳。
3. 操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。
4. EB Solution有一定毒性,请小心操作。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效。4℃运输,4℃保存。
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