产品说明

汇智泰康公司的致泻性大肠埃希氏菌多重PCR检测试剂盒可同时检测肠道致病性大肠埃希氏菌 (Enteropathogenic Escherichia coli.，EPEC)，肠道侵袭性大肠埃希氏菌(Enteroinvasive Escherichia coli.，EIEC)，产肠毒素大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli.，ETEC)，肠道出血性大肠埃希氏菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli.，EHEC)，和肠道集聚性大肠埃希氏菌(Enteroaggregative Escherichia coli.，EAEC)5种常见的致泻大肠埃希氏菌。

产品组成 （50次，25 µL PCR）

* Master Mix （2X）含有Taq DNA聚合酶， dNTP，含MgCl₂的PCR优化反应缓冲液。使用频率高时一旦融解请于4^oC保存或分装保存。

储存条件

-20^oC长期保存。多次反复冻融会降低检测效率。

使用说明

• DNA样本处理、反应体系配制、核酸扩增和结果鉴定等各步骤应分域进行，以避免交叉污染。
• 细菌基因组DNA可使用市售试剂盒提取，也可按以下方法快速制备：

从平板上挑取适量菌落，加入含有200 µL ddH₂O的灭菌离心管中，涡旋震

• 菌液煮沸10 min，冷却至室温后，13,000 rpm离心2 min。
• 将上清移至新离心管中，即得可用于本试剂盒检测的细菌DNA模板。

• PCR反应液配制：

2 X Master Mix 12.5 µL

Primer Mix 2.5µL

阳性对照/样品DNA 2 µL

H₂O 8 µL

反应终体积 25µL

• PCR反应条件：

94^oC 预变性 5min

94 ^oC 变性 30 sec

30个循环 63 ^oC 复性 30 sec

72 ^oC 延伸 1.5min

72 ^oC 延伸  5 min

• PCR反应完成后加入loading buffer，用无核酸染料琼脂糖凝胶（2%）电泳检测15 µL PCR扩增产物 (120 V，45 min)。电泳完后泡胶染色30min。5种致泻大肠埃希氏菌的检测结果如下图所示。

6.  注意事项：

试剂使用前建议短暂离心后开启。

PCR反应液请在冰中配制，以增强检测的特异性。