产品说明
CSPP多重PCR检测试剂盒可同时检测空肠弯曲菌(C. jejuni),结肠弯曲菌(C. coli),海鸥弯曲菌(C. lari),乌普萨拉弯曲菌(C. upsaliensis),和胎儿弯曲菌胚胎亚种(C. fetus subsp. fetus)等5种常见的弯曲菌属致病细菌。
产品组成 (50次,20 µL PCR)
组分 | 数量 | 体积 |
Master Mix (2X) * | 1管 | 500 µL |
Primer Mix | 1管 | 200 µL |
阳性对照 | 1管 | 50 µL |
H2O | 1管 | 1 mL |
* Master Mix (2X)含有Taq DNA聚合酶, dNTP,含MgCl2的PCR优化反应缓冲液,以及电泳时所必需的色素试剂。使用频率高时一旦融解请于4oC保存或分装保存。
储存条件
-20oC长期保存。多次反复冻融会降低检测效率。
使用说明
- DNA样本处理、反应体系配制、核酸扩增和结果鉴定等各步骤应分域进行,以避免交叉污染。
- 细菌基因组DNA可使用市售试剂盒提取,也可按以下方法快速制备:
- 从平板上挑取适量菌落,加入含有200 µL ddH2O的灭菌离心管中,涡旋震荡混匀,肉眼可见菌液浑浊即可。
- 菌液煮沸10 min,冷却至室温后,13,000 rpm离心2 min。
- 将上清移至新离心管中,即得可用于本试剂盒检测的细菌DNA模板。
- PCR反应液配制:
2 X Master Mix 10 µL
Primer Mix 4 µL
阳性对照/样品DNA 2 µL
H2O 4 µL
反应终体积 20 µL
- PCR反应条件:
95oC 预变性 6 min
95 oC 变性 30 sec
30个循环 59 oC 复性 30 sec
72 oC 延伸 30 sec
72 oC 延伸 7 min
- 琼脂糖凝胶(2%)电泳检测15 µL PCR扩增产物 (100 V,50 min)。5种弯曲菌属细菌的检测结果如下图所示,其中23S rRNA作为扩增反应的内参照,在所检测的5种弯曲菌属细菌均应可见其大小为650 bp的扩增片段。阳性对照应可见6条大小不同的扩增片段。
- 注意事项:
试剂使用前建议短暂离心后开启。
PCR反应液请在冰中配制,以增强检测的特异性。
本试剂盒中Master Mix包含电泳所必需的试剂,PCR反应后可直接电泳。