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详细介绍
DNA提取流程图：
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中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
100T | GOY-F10225 |
产品详细介绍：
保存：置4℃。 工作量：100 张切片。 有效期：一年。 所谓原位杂交是指借助于核酸分子杂交的方法，在显微镜水平检测和定位特异的核苷酸片段。现在原位杂交已成为在分子水平研究肿瘤和遗传性疾病的发生，发展和调控等根本性问题的有力工具，其作用是免疫组化所无法代替的。具有敏感性特高，操作简便和结果准确的优点。该试剂盒用于 mRNA的杂交，不推荐使用每个探针分子仅标记一个的寡核苷酸探针。 如果使用 cDNA 探针，应在杂交之前变性探针。 试剂盒中内容： 1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml； 2．预杂交液 2ml； 3.寡核苷酸探针杂交液 2ml； 4.封闭液 5ml; 5.化鼠抗 5ml; 6．SABC-FITC 100ul(1:100) |
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物*分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
三0酸腺苷酶 英文名称： Adenosine iphosphate 规格： 48T/96T 英文缩写： ATP 3-Amino-5-mercapto-1,2,4-triazole 16691-43-3 中文名：3-氨基-5-巯基-1,2,4-三唑 分子式：C2H4N4S 度：98.0%
三0酸脱氧核苷酸混合溶液 10x0.5ml Amoxapine 中文名：阿莫沙平 分子式：C17H16ClN3O 度：98.0%
三(羟甲基)基盐酸盐 100g 3-Amino-4-methylbenzamide 19406-86-1 中文名：3-氨基-4-甲酰胺 分子式：C8H10N2O 度：98.0%
腮腺炎病毒(MuV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T 3-Amino-4-hydroxybenzoic acid 1571-72-8 中文名：3-氨基-4-羟基苯甲酸 分子式：C7H7NO3 度：98.0%
瑞氏－姬姆萨复合染液 Vascular permeability test solion 3-Amino-3-phenylpropionic acid 614-19-7 中文名：C9H11NO2 分子式：C9H11NO2 度：98.0%
N-乙酰-DL-甲硫 N-Acetyl-DL-mine 质量规格：0.99 人α羟基脱氢酶(αHBDH)ELISA检测试剂盒Humanα-HydroxybyrateDehydrogenase,αHBDHELISAKit 96T/48T
DL-高半胱 DL-Homocysteine 质量规格：0.95 大鼠血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)试剂盒 Rat Vascular Endothelial cell Growth Factor B,VEGF-B ELISA kit
间氟-DL-酪 m-Fluoro-DL-tyrosine 质量规格：0.99 英文名称RatFree-TestoteroneELISAKit大鼠游离睾同(Free-Testoterone)规格：96T/48T
钙蛋白酶抑制剂I(进口) Calpain Inhibitor I(ALLN) 质量规格：≥95%,美国进口 革兰氏阳性细菌基因组DNA化试剂盒20
DL-丙氨酰-DL-丙 DL-Ala-DL-Ala 质量规格：0.97 ELISAKitHBxAg人乙型肝炎病毒X抗原规格：48T/96T
DL-丙氨酰-DL-正缬 DL-Alanyl-DL-norvaline 质量规格：0.99 小鼠金属硫蛋白1(MT-1)ELISA试剂盒 ，英文名： MT-1 ELISA Kit
3-(1-萘基)-L-丙 3-(1-Naphthyl)-L-alanine 质量规格：>98%,BR 大鼠0脂酶A2(PL-A2)ELISA检测试剂盒RatPhospholipidaseA2,PL-A2ELISAKit 96T/48T
Fmoc-3-(2-萘基）-D-丙 Fmoc-3-(2-Naphthyl)-D-alanine 质量规格：0.98 人促胰液素/分泌素受体(SR)试剂盒 Human secretin receptor,SR ELISA Kit
L-瓜 L-Citrulline 质量规格：>99%,BR RatsecretedphospholipaseA2,sPLA2ELISAKit大鼠分泌型0脂酶A2(sPLA2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Fmoc-L-瓜 Fmoc-L-Citrulline 质量规格：>98%,BR HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒标准曲线定量PCR扩增检测试剂盒2
敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅴ(FITC)组织冠状病毒3C类（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性
荧光淬灭法定量检测试剂盒
细胞冠状病毒3C类（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性
体液人类巨细胞病毒（HCMV PROTEASE）活性荧光淬灭法
血液人类巨细胞病毒（HCMV PROTEASE）活性荧光淬灭法
实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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