250mL-BLOTTO溶液_探针标记及检测-上海谷研实业有限公司

供货周期	现货	货号	GOY-F10162
应用领域	化工	主要用途	仅供科研使用

产品详细介绍：

BLOTTO全名是Bovine Lacto TransferTechnique Optimizer，是一种含有脱脂奶粉、磷酸盐和抗菌剂的杂交阻断剂，可以用于DNA杂交(Southern杂交、斑点杂交、菌落杂交)、Western杂交、ELISA；但不能用于RNA杂交和低拷贝的Southern杂交。也不能与含高浓度的SDS混用。

储存条件：低温运输、-4℃保存(不能保存在-20℃)，有效期一年。

本试剂盒是基于毛细管转膜法的Southern和Northern印迹膜制备试剂，专门用于从电泳得到的凝胶中制备用于Southern杂交和Northern杂交的印迹膜。

产品特点：

1.即开即用，提供制备5张13×20cm大小的Southern杂交和Northern杂交印迹膜所需要的印迹膜和溶液，不需要用户单独准备。

2.快速：转膜过程只需要1小时，整个过程只需要2.5小时(对DNA)或1.5小时(对RNA)。

3.跟硝酸纤维素膜、带电尼龙膜、中性尼龙膜和PVDF膜兼容。包括Nytron、Gene Screen Plus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon等。

4.A型提供硝酸纤维素膜，适用于400bp以上的靶分子，背景低。B型提供带电尼龙膜，适用于40bp以上的靶分子，结合力强。如需中性尼龙膜或PVDF膜，需另购。

5.使用优化的下向转膜法，不但效率比上行转膜法高30%左右，而且条带弥散度低、分辨率高。

可用琼脂糖胶(包括脉冲电泳胶，DNA电泳、RNA甲醛胶电泳和RNA戊二醛电泳)和DNA PAGE胶。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

下列是产品的订购信息!产品仅用于科研

中文名称	英文名称	产品规格	货号
BLOTTO溶液	BLOTTO Solution	250mL	GOY-F10162

DNA提取流程图：

实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊(25:24:1)抽提两次,:异戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
兔内皮型合成酶(eNOS)ELISAKit 5-Amino-1-(2-hydroxyethyl)pyrazole 73616-27-0 中文名：分子式：C5H9N3O 度：98.0% 关键词：

兔内皮素-1(rabbit ET-1) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 5-Acetyl-3-chloro-10,11-dihydro-5H-dibenz[b,f]azepine 25961-11-9 中文名：分子式：C16H14ClNO 度：98.0% 关键词：

兔内皮素（Endothelin-1）ELISA试剂盒 5-Amino-2-methylindole 中文名：5-氨基-2-甲基吲哚分子式：C9H10N2

兔内皮素英文名称： Rabbit Endothelin 1 规格： 48T/96T 英文缩写： ET-1 Pemetrexed 137281-23-3 中文名：培美曲塞二钠分子式：C20H21N5O6 度：98.0% 关键词：

兔内啡肽-b(rabbit Endorphin-b) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 5-Amino-2-methylindole 7570-49-2 中文名：5-氨基-2-甲基吲哚分子式：C9H10N2
硬脂酸甲酯(>99.5%(GC),标准物质) Methyl Stearate 质量规格：>99.5%(GC),标准物质大鼠组胺(HIS)ELISA检测试剂盒RatHistamine,HISELISAKit 96T/48T

亚麻酸甲酯(>98.0%(GC),标准物质) Methyl Linolenate 质量规格：>98.0%(GC),标准物质人蛋白酶体(prosome,macropain)亚基,β型,1(PSMB1)试剂盒 Human PSMB1 ELISA kit

亚油酸甲酯(>99.0%(GC)，标准物质) Methyl Linoleate 质量规格：>99.0%(GC)，标准物质 RatovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit大鼠卵清蛋白特异性IgE(OVAsIgE)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1-十一烯(>99.5%(GC),标准物质) 1-Undecene 质量规格：>99.5%(GC),标准物质 Gamborg’sB5*培养基500毫升溶液/片剂

1-十二烯(>99.5%(GC),标准物质) 1-Dodecene 质量规格：>99.5%(GC),标准物质 MouseSolubleEndoglin,ENG/sCD105ELISA试剂盒小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1-十三烯(>99.5%(GC),标准物质) 1-Tridecene 质量规格：>99.5%(GC),标准物质小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)Elisa 试剂盒

1-十四烯(>99.5%(GC),标准物质) 1-Tetradecene 质量规格：>99.5%(GC),标准物质 Rat macrophage inflammatory protein 2 (MIP-2) ELISA Kit 大鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA试剂盒

1-十五烯(>99.0%(GC)，标准物质) 1-Pentadecene 质量规格：>99.0%(GC)，标准物质 Humanai-Reticulinaibody,ARAELISAKit 人抗网硬蛋白抗体(ARA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

1-十六烯(>99.5%(GC),标准物质) 1-Hexadecene 质量规格：>99.5%(GC),标准物质 Humanalcoholdehydrogenase,ADHELISA试剂盒人乙脱氢酶(ADH)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1-十七烯(>99.5%(GC),标准物质) 1-Heptadecene 质量规格：>99.5%(GC),标准物质植物P型ATP酶(PtypeATPase)活性比色法定量检测试剂盒20
BLOTTO溶液组织NEK2激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）

细胞NEK2激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）

组织MSK2激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）

细胞MSK2激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）

组织MSK1激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C）
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物*分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。