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DNA实验技术：琼脂糖核酸电泳
2013-8-22 阅读(1890)
1. 用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子；
2. 根据欲分离 DNA 片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般20~30 ml） ；
3. 放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分 混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；
4. 室温下 30~ 45 分钟后凝胶*凝结， 小心拔出梳子， 将凝胶安放在电泳内槽；
5. 向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面 1mm 为宜，如样品孔内有气 泡，应设法除去；
6. 在 DNA 样品中加入 10×体积的载样缓冲液（loading buffer） ，混匀后，用枪 将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；
7. 接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记DNA 样品由负极往正极泳动 （ 靠近加样孔的一端为负） 。一般 60～100V 电压，电泳 20～40min 即可；
8. 根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳；
9. 电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子 量标准 Marker 比较被扩增产物的大小。
琼脂糖凝胶浓度与线形 DNA的*分辨范围
| 琼脂糖凝胶浓度 | 线形 DNA的*分辨范围（bp） |
|---|---|
| 0.5% | 1,000～30,000 |
| 0.7% | 800～12,000 |
| 1.0% | 500～10,000 |
| 1.2% | 400～7,000 |
| 1.5% | 200～3,000 |
| 2.0% | 50～2,000 |
编辑： hollyemp
