使用 SEC-MALS 联用技术鉴定司美格鲁肽寡聚物

胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 是一种肠促胰岛素激素，已知能够通过刺激胰岛素分泌来降低血糖水平，且具有减缓胃排空和增加进食后饱腹感的作用。21 世纪初，研究人员开发出模拟内源性 GLP-1功能的 GLP-1 受体激动剂或类似物 (GLP-1a)，用于治疗 2 型糖尿病。在诺和诺德™ 的重磅药物 Ozempic™（司美格鲁肽）取得成功之后，GLP-1a 作为减肥药物，再次引起市场的巨大关注。

目前，GLP-1 固有的物理不稳定性仍然是药物加工和制剂领域的一大挑战。在特定条件下，这种肽类激素也是少数容易聚集的肽/蛋白类型之一，表现出异常的纤维化动力学特性。为了确保GLP-1a 制剂的安全性和给药的有效性，表征制剂中存在的寡聚状态并了解其聚集途径至关重要。例如，诺和诺德的利拉鲁肽药物会自组装成七聚体，并且在注射液中主要以这种形式存在[1]。另外，由于多肽的低聚体结构对缓冲溶液十分敏感，因此必须掌握缓冲溶液配方对低聚化的影响[2]。

在生物制药领域，体积排阻色谱 (SEC) 是一种常用的聚集体分析技术。常规 SEC 基于目标物在色谱柱上的洗脱行为以及与用于建立柱校正曲线的标准品相似的假设，根据分析物的保留时间计算得出分子量。然而，在常规 SEC 分析中，由于目标物与标准品之间往往存在化学结构差异，导致分子量计算不可避免地产生偏差，因此采用该方法获得的分子量结果一般被称为相对分子量。相对分子量无法准确表达样品真实的聚集状态和构象关系。例如，GLP-1a 多肽样品在 SEC 模式下可能以多种聚集形式存在，或者在色谱柱上发生解聚，将导致难以通过柱校正基于样品保留时间来准确计算寡聚状态的分子量。而体积排阻色谱-多角度激光光散射检测器 (SEC-MALS) 联用技术能够直接测量绝对分子量，而不依赖于色谱柱校正，由此克服了常规 SEC 方法带来的分子量计算结果的不确定性。

在本文中，我们分别在天然 SEC 条件和变性 SEC 条件下，使用 SEC-MALS 联用技术对经典 GLP-1a 药物司美格鲁肽进行了研究。重点介绍了使用 SEC-MALS 表征司美格鲁肽或其他 GLP-1a的寡聚态以及制剂配方对聚集体的影响，为 GLP-1a 用药安全性以及有效性研究提供了科学的实验数据参考。

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