基因编辑用酶的定制开发/Cas核酸酶

SpCas9是一种依赖于sgRNA引导的 DNA内切核酸酶。在靶标DNA存在PAM（5’-NGG-3’）的情况下，SpCas9 Nuclease能在sgRNA引导下特异性结合并切割靶标dsDNA，使DNA双链断裂并生成平末端。其切割位点位于目标序列target sequence内，距离PAM 3个碱基的位置。SpCas9不仅可用于基因编辑，还可应用于体外靶标 DNA 的切割、目的片段的克隆等实验。

LbCas12a是一种依赖crRNA介导的核酸内切酶，在靶标双链DNA存在PAM（（5’-TTTV-3’）序列的情况下，LbCas12a能在crRNA介导下特异性识别并切割双链DNA，而LbCas12a 特异性切割靶标单链DNA不依赖PAM序列。LbCas12a-crRNA复合物与互补dsDNA或ssDNA结合后，其非特异性ssDNA反式切割活性被激活，通过设计两端标记荧光基团或其它小分子标记的Reporter ssDNA，可实现Cas12a对DNA模板的检测和信号放大，可通过荧光仪和试纸条观察结果。

AapCas12b核酸酶是一种依赖 sgRNA介导的核酸内切酶，在靶标双链DNA存在PAM（5’-TTN-3’）序列的情况下，由sgRNA介导特异性识别并切割双链DNA，而AapCas12b特异性切割靶标单链DNA则不依赖PAM序列。AapCas12b-crRNA复合物与互补的dsDNA或者ssDNA结合后，其非特异性ssDNA反式切割活性被激活。AapCas12b的好的反应温度为60℃，因此适合与环介导等温扩增（LAMP）联用。

LbuCas13a是一种由crRNA介导的核酸内切酶，对PAM（PFS）位点无依赖性。在crRNA识别并切割靶标RNA时，Lbucas13a的反式切割活性被激活，可非特异切割体系中单链 RNA(ssRNA)。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针，可实现对RNA模板的检测和信号放大，可通过荧光仪或试纸条观察结果。

LwaCas13a是一种由crRNA介导的核酸内切酶，与LbuCas13a一样，对PAM（PFS）位点无依赖性。在crRNA识别并切割靶标RNA时，Lwacas13a的反式切割活性被激活，可实现对体系中的ssRNA的非特异切割。通过设计两端标记荧光基团或者其他标记物的RNA探针，可实现CRISPR/Cas13a对RNA模板的检测和信号放大。可通过荧光仪或试纸观察结果。