50T 五种致泻性大肠埃希氏菌PCR检测试剂盒

产品简介：

常见的致泻大肠埃希氏菌主要包括肠道致病性大肠埃希氏菌（Enteropathogenic Escherichia coli，EPEC）、肠道侵袭性大肠埃希氏菌（Enteroinvasive Escherichia coli，EIEC）、产肠毒素大肠埃希氏菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）、肠道出血性大肠埃希氏菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）和肠道集聚性大肠埃希氏菌（Enteroaggregative Escherichia coli，EAEC）5 种。

本试剂盒适用于这五种致泻性大肠埃希氏菌感染的辅助诊断及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

产品特点：

一、严格的质控体系

所有试剂盒从原料到成品都经过严格的质量控制，确保每一盒试剂盒都具有稳定可靠的质量，让您的检测结果更可信。

二、高灵敏度

产品经过不断优化，具有出色的灵敏度，能够检测到极微量的五种致泻性大肠埃希氏菌核酸，不放过任何潜在的感染风险。

三、便捷操作

综合各项指标特性，研发出操作便捷的试剂盒。从样本制备到结果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能轻松上手。

四、多样的检测验证样本

该试剂盒经过多种样本的检测验证，适用于临床样本、食品样品、增菌液及其培养物中提取的 DNA 样本等多种常见样本，满足不同的检测需求。

五、个性化定制服务

专业的研发团队可为您提供个性化的定制服务，根据您的特殊需求进行产品优化和调整，为您提供更贴合实际的检测方案。

六、丰富的产品线

除了五种致泻性大肠埃希氏菌PCR检测试剂盒，我们还提供Elisa试剂盒以及其它快检试剂盒，满足您在不同领域的检测需求。

七、完善的售前售后服务

我们拥有完善专业的售前售后服务团队，在您购买前为您提供详细的产品咨询和技术支持，购买后为您解决使用过程中遇到的任何问题，让您无后顾之忧。

产品参数：

产品规格

50T/盒，可满足一定规模的检测需求。

检测方法

实时荧光PCR，具有快速、准确、灵敏等优点。

适用仪器

ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量PCR 检测仪。

标本采集

从临床样本、食品样品、增菌液及其培养物中提取的 DNA 样本。

保存和运输

采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24 h；若需长期保存，应放置-70℃以下保存，冻融不超过 3 次。

使用方法：

1.样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

采用商品化试剂盒，按照试剂盒说明书进行操作。

1.2核酸提取

推荐采用公司生产的核酸提取-或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。

2.试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 10 份，多配制 1 份)。每管反应液同样配置。

试剂反应液酶液

反应液 119μL1μL

反应液 219μL1μL

反应液 319μL1μL

分别将 3 个混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，20μL/管。

3.加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4.PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM，VIC 或 HEX，ROX， CY5， 淬灭通道（Quencher Dye）选择 NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

4.3推荐循环参数设置：

步骤循环数温度时间收集荧光信号

11 cycle95℃2min否

240cycles95℃15sec否

60℃30sec是

*其它仪器比如 ABI7500 采集荧光设定为 31sec，对结果无影响。

5.1结果分析条件设定（请参照各仪器使用说明书进行设置，以分析 ABI7500 仪器为例）

反应结束后自动保存结果，根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用户可根据实际情况自行调整，Start 值可设在 3～5、End 值可设在 10～15，使阈值线位于扩增曲线指数期，阴性质控品的扩增曲线平直或低于阈值线），点击 Analyze 自动获得分析结果。

5.2结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线； 阴性：样本检测结果无 Ct 值，且无特异性扩增曲线；

可疑：样本检测结果 40＜Ct 值≤45，建议重复检测，如果检测通道仍为 40<Ct 值≤45，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性。

多重项目荧光通道检测项目

stx1/eae/stx2/bfpBFAM（stx1）eae（+）Stx1（-）bfpB（+）Stx2（-）判为典型 EPEC；eae（+）

Stx1（-）bfpB（-）Stx2（-）判为非典型 EPEC

VIC/HEX（eae）

ROX（stx2）eae（+/-）bfpB（-），Stx1  和 Stx2  至少一个为阳性判为 EHEC

CY5（bfpB）

ipaH/Stp/lt/SthFAM（ipaH）ipaH（+）判为 EIEC

VIC/HE（Stp）

Stp，Sth，lt 至少一个为阳性判为 ETEC

ROX（lt）

CY5（Sth）

aggR/uidA/astA/picFAM（aggR）aggR、pic、astA 中一条或者一条以上阳性均可判为 EAEC；

当只有 uidA（+），其余检测目标均为阴性时，判为非致泻性大肠埃希氏菌

VIC/HEX（uidA）

ROX（astA）

CY5（pic）

*astA、pic 基因可在细菌间转移，当与其他毒力基因同时阳性时，astA、pic 基因不作为型别判定依据。如检测 uidA、lt、astA 同时阳性，则判定该菌株为 ETEC；检测 uidA、ipaH、pic 同时阳性，则判定该菌株为 EIEC。注意： EPEC/EHEC/EIEC/ETEC/EAEC 的结果判读标准来源于 GB4789.6-2016。

5.3质控标准

阴性质控品：阴性对照 Ct 值>35 或无特异性扩增曲线； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数增长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

6.检测方法的局限性

1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

2.样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

3.阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

4.病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；

5.不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

6.试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；

7.本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检。

注意事项：

1.所有操作严格按照说明书进行；

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完-全混匀并短暂离心；

3.反应液应避光保存；

4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

9.本产品仅供科研。

选择我们的五种致泻性大肠埃希氏菌PCR检测试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！