M1354 梭菌显色培养基

梭菌显色培养基

M-CP Agar Base

基本信息

应用

用于欧盟指导委员会推荐的对水样中产气荚膜梭菌的分离和计数（采用膜过滤法）（3）

背景　
 

产气荚膜梭菌是一种革兰氏阳性芽孢杆菌，是人畜共患病原菌，也是人畜肠道正常菌群，它广泛存在于自然环境如土壤、粪便和污水中（1）。产气荚膜梭菌分为五个亚型，其中一些亚型能分泌外毒素。产气荚膜梭菌作为条件致病菌，可导致水和食品污染，引发畜禽和人类疾病，如坏死性肠炎、腹泻、肠毒血症、气性坏疽和食物中毒。

有报道指出，大肠菌群作为水质微生物学指标是不可靠的，而产气荚膜梭菌可作为一个水污染的指示菌。欧洲已将其作为水质卫生标准的补充条款，WHO已在水质检测中将其作为水质污染的微生物。产气荚膜梭菌数量与水污染程度有一定的相关关系。我国《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》GB8538—2016规定，天然矿泉水产品和水源水需检测产气荚膜梭菌。

目前，检测产气荚膜梭菌多采用培养基法和PCR法。实践证明，采用快速膜过滤技术和显色培养基(mCP培养基），简单、易行、可靠。

原理

M-CP平板是根据Armon和Payment的配方而成（2）。培养基中的胰蛋白䏡、酵母粉提供氮源营养，蔗糖提供碳源营养。溴甲酚紫为pH指示剂。吲哚β-D-葡萄糖苷为β-D-葡糖苷酶或纤维二糖酶的显色底物，二磷酸酚酞用于检测酸性磷酸化酶。添加的D-环丝氨酸和多粘菌素B（FD153）抑制伴随的其他菌群。厌氧环境也提供了进一步的选择性。当黄色（纤维二糖酶阴性）菌落在暴露于氨烟30秒后变为玫瑰红时，即可认为是产气荚膜梭菌。颜色鉴别有时是困难的，因此，可挑取典型菌落（黄变粉色）和非典型菌落（绿色或没变色）进行验证。验证试验可通过硫还原、革兰氏阳性、芽孢杆状、无动力性、硝还原、明胶液化、乳糖发酵和其他生化试验证实（4）。

培养基组分

最终pH值为7.6±0.2（25℃）

配置

35.6g干粉溶485ml蒸馏水。加热煮沸使培养基全溶。15磅121℃高压灭菌15分钟。冷却至45-50℃。用5ml无菌蒸馏水溶解添加剂1（FD153），用10ml无菌蒸馏水溶解改良的添加剂2（FD154A），将添加剂2（FD154）室温孵育。在485ml无菌溶解冷却的梭菌显色培养基溶液中，无菌加入1管添加剂1（FD153），1管添加剂2（FD154）或改良的添加剂2（FD154A），混匀，倒入无菌平皿。

质量控制

外观：淡黄至淡绿色松散粉末。

成胶性：牢固，与1.5％琼脂凝胶相当。

成品颜色和透明度：紫色透明至轻微不透明凝胶。

pH值：7.40-7.80

培养反应：在无氧条件下加入添加剂后，43-45℃孵育18-24小时，观察接种反应。

*暴露于氨烟30秒后菌落变为暗玫瑰色至淡粉红色。

参考文献
1. Czeczulin J. R., Hanna P. C., Mcclane B. A., 1993, Infect. Immun., 61: 3429-3439.

2. Armon R. and Payment P., 1988, Can. J. Microbiol., 34:78-79.

3. Directive of the Council of the European Union 98/83/EC

4. Sartory D. P., Field M., Curbishley S. M., Pritchard A. M., 1998, Lett. Appl. Microbiol., 27:323-327.

产品引用文献

1. Kadam, A.M., et al., Pathogen removal from municipal wastewater in constructed soil filter.Ecological Engineering, 2008. 33(1): p. 37‐44.

2. Raed S. Al‐Wasify, A.‐S.A. Al‐Sayed, and M.M. Kamel, Sensitivity and Specificity of Chromogenic Media for Detection of Some Pathogens in Water. International Journal of Environment and Sustainability, 2013. 2(1): p. 1‐9.