灵长类胚胎/诱导多能干细胞培养基

灵长类胚胎干细胞/诱导多能干细胞培养基（无饲养层培养）

ReproFF2 

◆特点

●　一周只需处理细胞三次

●　只需常规培养基用量的一半

●　维持干细胞的未分化状态

●　维持干细的分化能力

注1）由于不含bFGF，请在培养人iPS/ES细胞时添加。

※保存温度：-20℃

※含有医药用以外的剧毒物0.0008％的2-巯.基乙醇

◆优势

●　反复冻融的细胞依然保持存活。

●　具有长期培养核型稳定性。

●　转移培养基后细胞传代培养状态稳定。操作简便。

●　iPS细胞系菌落完整且免疫染色为阳性

◆产品概念：周末无需处理

◆无饲养层ReproFF2培养基对干细胞未分化状态的维持

维持人iPS细胞的未分化状态的培养

●　使用201B7株人iPS细胞

●　ReproFF2（无饲养层）培养：Passage 10.day 3

●　饲养层培养：Passage 48.day 3

1.菌落的形态和碱性磷酸酶活性的确认

　　图为使用ReproFF2无饲养层培养的细胞和有饲养层培养的细胞有着相似的菌落形态和碱性磷酸酶活性阳性。

　　把细胞移到ReproFF2培养基后，可能会出现细胞状态恶化的情况，但继续传代培养的话，状态就会稳定下来。

2.未分化标记物的免疫染色结果

　　用ReproFF2无饲养层培养的人iPS细胞和有饲养层培养的细胞相似，都能表达Oct3/4,Nanog,SSEA-1,TRA-1-60。

3.未分化标记物的FACS分析

　　用ReproFF2培养基无饲养层培养的人iPS细胞和有饲养层培养的细胞显示了相似的阳性率。

4.长期培养时核型的稳定性

　　对使用ReproFF2连续培养到第30代的人iPS细胞的核型进行分析。结果显示， ReproFF2培养基适合稳定长期的无饲养层培养。

5.人ES细胞的未分化维持培养

　　使用KhES-1株人ES细胞

　　使用ReproFF2无饲养层培养的人ES细胞显示为碱性磷酸酶染色阳性、Oct3/ 4阳性、未分化性得到良好的维持。

◆使用ReproFF2培养基培养人iPS细胞时，菌落状态不好的情况

　　ReproFF2虽然是适合培养人ES/iPS细胞的培养基，但是，根据培养操作等状况的不同，有时会出现菌落状态恶化的情况。

　　如出现以下所述的情况是没有问题的，请遵从下文指示放心继续培养细胞。

细胞移到ReproFF2培养基后菌落的形态

　　把细胞移到ReproFF2培养基后，可能会出现细胞状态恶化的情况（见下左图）。

　　继续进行传代培养的话，状态将会稳定下来（见下右图），请继续第4代的传代培养。

细胞移到ReproFF2培养基的第三天                  传代培养到第四代的第六天

（状态差的菌落）                                               （恢复状态的菌落）

使用ReproFF2培养基传代后的情况（传代时菌落太小的情况）

　　传代培养后，下左图的细胞可能是传代培养时菌落过小的情况。

　　解决方法：减少移液的次数或者降低移液管的强度。

  传代培养时，菌落太小　                           菌落在200-300um中传代培养

                                                                          （菌落大小恢复正常）

◆ReproFF2培养基无饲养层培养的人iPS细胞的分化能力

　　使用ReproFF2培养的人iPS细胞和有饲养层培养的细胞相似，都有向心肌细胞和神经细胞分化的能力。

人iPS细胞向心肌细胞的分化

　　把使用ReproFF2无饲养层培养的人iPS细胞向心肌细胞诱导分化，结果得到表达心肌标记物阳性的跳动心肌细胞团。

　　由此得出，使用ReproFF2无饲养层培养的人iPS细胞和有饲养层培养的细胞一样，拥有向心肌细胞分化的能力。

※α-MHC, Connexin-43, Cardiac Troponin T: 心肌标记物

人iPS细胞向神经前体细胞、神经细胞的分化

　　使用ReproFF2无饲养层培养的人iPS细胞向神经细胞诱导分化，形成玫瑰花结构（rosette），可以观察到βIII-tubulin的表达以及TH阳性的神经细胞。

　　由此得知，使用ReproFF2无饲养层培养的人iPS细胞和有饲养层培养的细胞一样，拥有向神经细胞分化的能力。

※βIII-tubulin：神经纤维的标记物

※rosette：神经前体细胞的标记物形态的特征
※TH (Tyrosine 3-Hydroxyrase)：多巴胺能神经元细胞的标记物

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