特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒
- 公司名称 富士胶片和光（广州）贸易有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型号
- 产地
- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2020/9/30 17:11:17
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富士胶片和光（广州）贸易有限公司是日本富士胶片和光纯药株式会社（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation）在中国的子公司，主营富士胶片和光品牌试剂产品，供应产品超50,000种，囊括了生命科学、药品生产、品质管理领域、合成与材料、分析各个领域。
基于“想要为科研人员提供帮助”的创业初衷，富士胶片和光纯药（FUJIFILM Wako）作为一家满足前沿研究领域需求的综合试剂制造商，一直致力于生产和开发高品质的产品，并于2022年6月迎来了创业100周年。通过发挥企业优势“技术力”，以及三大核心业务的试剂业务、化成品业务和临床诊断业务来满足学术界、企业以及医疗相关企业的广泛需求。
凭借100 年的历史经验，富士胶片和光纯药（FUJIFILM Wako）在日本市场占据高份额，作为全球性的试剂供应商，以“成就科学未来之力，创造幸福源泉”为愿景，致力于高品质试剂的生产与开发。通过提供试剂，为再生医疗、癌症、精神/神经疾病和抗体药物等各类基础研究和前沿研究做贡献，并获得 ISO9001等多项国际认证。基于可靠的技术和品质、以及科研人员之间的信赖，作为富士胶片集团的一员将不断实现全球化发展。
主要业务——试剂
作为富士胶片和光纯药（FUJIFILM Wako）试剂业务的中国子公司，富士胶片和光（广州）贸易有限公司可提供各个领域测试和研究用途的生命科学试剂和化学试剂。
试剂业务 | ||||||
可广泛提供生命科学和化学领域的测试研究用产品 | ||||||
生命科学领域 | 化学领域 | |||||
● 培养基生产 ● 抗体制备 ● 定制服务 |
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● 认证标准品 ● 有机化学 |
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作为优质的试剂企业，我们可以提供满足不同客户需求的高品质产品。试剂业务自创业以来，已持续不断地提供了广泛领域的试剂产品，并致力于成为满足前沿技术领域各项研究需求的试剂制造商。今后也将以过往技术经验为基石，发挥作为可信赖的研究支持合作伙伴的作用。
产品一览
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● 常规试剂 ● 有机合成试剂 ● 环境分析试剂 ● 精密分析试剂 ● 色谱试剂 | ● 生化学用试剂 ● 基因研究用试剂 ● 免疫研究用试剂 ● 病理研究用试剂 ● 细胞培养用试剂 | ● 内毒素检测用试剂 ● 生物药生产用培养基 ● 研究用基础培养基 ● 定制服务 ● 设备和耗材 |
丰富的产品类目以及快速供应体系
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 | 致力于持续监测市场的需求并跟踪世界的研究动向。为了能够及时准确地响应客户的需求，富士胶片和光建立了以自有品牌为中心的丰富产品体系，为各界的研究和开发领域提供细致的服务与支持 。 |
高品质的试剂提供和生产体系
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 | 试剂生产工厂以东京工厂和大阪工厂为中心，发挥优质技术力量建立的高品质生产体系。爱知工厂配备齐全的培养基生产设备，可用于生产再生医疗和生物制药生产用的培养基。 |
优质的客户服务和产品信息
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 | 通过定期更新的主页网站、富士胶片和光生物微信公众号、富士胶片和光化学分析微信公众号，以及不定期的富士胶片和光生物视频号、网络研讨会和线下展会，致力于为客户提供优质的服务以及不断更新的产品信息。 |
强化全球化事业的开展
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 | 建立日本海外销售体系，通过提供富士胶片和光纯药（FUJIFILM Wako）优质研发力量生产的高品质产品，积极推进全球化业务。 |
企业历史沿革
年份 | 内容 |
1922年6月 | 从武田長兵衞商店（现武田薬品工業株式会社）的化学药品部门独立出来，成立了武田化学薬品 株式会社 |
1940年 | 大阪工厂竣工 |
1944年 | 東京工厂竣工 |
1947年 | 更名为和光純薬工業株式会社 |
1950年 | 展开化成品业务 |
1952年 | 总部迁移至大阪 |
1960年 | 展开临床检测药业务 |
1968年 | 播磨工厂竣工 |
1972年 | 公司总部竣工 |
1974年 | 成立德国和光純薬有限会社（今・FUJIFILM Wako Chemicals Europe GmbH） |
1981年 | 成立美国和光純薬株式会社（今・FUJIFILM Wako Chemicals U.S.A Corporation） |
1989年 | 建设东部配送中心 |
1991年 | 建设西部配送中心 |
2004年 | 愛知工厂竣工 |
2012年 | 成立和光純耀（上海）化学有限公司（今・富士胶片和光纯药（上海）化学有限公司） |
2015年 | 收购株式会社シバヤギ（今・群馬办事处） |
2017年 | 成为FUJIFILM Corporation的全资子公司 |
2018年 | 更名为富士胶片和光纯药株式会社 |
2019年 | 合并IS Japan Co.,Ltd.（今・户田办事处） |
2022年 | 成立100周年 |
生物化学试剂、仪器和耗材
| 供货周期 | 一个月以上 | 应用领域 | 生物产业 |
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特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒
ER-Protein Capture Kit
ER-Protein Capture kit是一款利用荧光标记物特异性标记ER驻留蛋白，再使用标签捕获抗体通过免疫沉淀法纯化标记蛋白的试剂盒。可用于ER相关蛋白的全面鉴定与定量分析有或无刺激（例如内质网应激）下靶蛋白的ER驻留量。
※ 本产品是funakoshi基于京都大学工学研究科浜地格教授、田村朋则讲师的研究成果商品化销售的产品。
※ 本产品仅供研究使用。研究以外不可使用。
◆ER蛋白的回收方法与问题点
ER （内质网；Endoplasmic Reticulum）是一种通常在细胞内占据约20%体积的细胞器，结构非常复杂且遍布整个细胞。ER是负责细胞内蛋白质生物合成的中央细胞器，在多肽链合成、通过伴侣蛋白适当折叠、排除异常蛋白等，从生物合成到品质管理中起着重要作用。ER还担任分泌路径的一部分，是细胞膜蛋白和细胞外分泌蛋白通过的细胞器。另外，它还被认为对于脂质代谢和脂肪滴形成十分重要，因此能够分离、鉴定并定量分析ER蛋白的方法备受期待。然而，不同于其他细胞器，特异性纯化ER的的技术十分贫乏，选择性回收ER蛋白并不容易。
ER Protein Capture Kit是由京都大学浜地格教授、田村朋则讲师等开发的基于ER驻留蛋白标记技术商品化的ER蛋白选择性标记、纯化试剂盒。通过使用ER驻留蛋白标记试剂ERM （ER-localizable Reactive Molecule），可以利用荧光标记物标记ER驻留蛋白，然后通过针对该标记物的特异性抗体进行纯化，选择性回收ER蛋白。无需超速离心机等特殊的机器，仅需简单操作便可纯化ER蛋白。除了能够通过蛋白组学进行全面鉴定外，本产品还适用于相对定量分析各种刺激处理下的ER驻留量。
◆试剂盒内容
本试剂盒由两部分组成。
A：ER驻留蛋白标记试剂ERM
A：（本试剂与产品名称为ERseeing、产品编号FDV-0038为同一试剂。可单独购买，也可以用作ER成像试剂）
B：标签捕获抗体（纯化兔多克隆IgG抗体）
A：※ 产品不包含用于细胞裂解液制备用的溶解缓冲液或免疫沉淀所需的Protein A / G树脂等。请另行购买。
◆原理和实验流程
ER驻留蛋白标记试剂ERM是一种在ER驻留性绿色荧光色素（Rhodol衍生物）上缀合蛋白标记基团的化合物。将ERM添加到活细胞后，由于色素部分的特性，显示出较高的ER驻留性。在ER中迅速浓缩后，通过蛋白标记基团用荧光标记物标记ER蛋白物（Step-1）。标记反应后破碎细胞制备细胞裂解液（Step-2），然后通过使用标签捕获抗体（抗Rhodol抗体）进行免疫沉淀（Step-3），可以选择性地回收被ERM标记的ER蛋白。由于回收的蛋白上带有荧光基团，使用SDS-PAGE分离后，可以通过CBB/银染或荧光成像仪检测出来（Step-4）。进行SDS-PAGE分离后，可以通过LC / MS进行全面蛋白组学分析或使用任何抗体的蛋白印迹法鉴定ER蛋白。
◆原著论文
Fujisawa et al., J. Am. Chem. Soc., 140, 17060～17070 (2018). Chemical Profiling of the Endoplasmic Reticulum Proteome Using Designer Labeling Reagents.
◆实验参考数据
■ ERM的激发/发射光谱
■ 激发光谱（蓝）以及发射光谱（绿）
■ ※ 适用于普通的绿色荧光色素FITC观察条件
■ ER特异性检验
■ 通过与各种细胞器标记共染色评价本试剂的ER特异性。观察到ERM（100 nM）与ER标记试剂高度共定位（皮尔逊相关系数>0.9）。另一方面，未观察到本试剂与溶酶体标记、线粒体标记的共定位。高尔基体标记观察到部分共定位，应该是因为本试剂所标记的蛋白通过Golgi体运输从ER转移至分泌路径。此外，添加ER-Golgi运输抑制剂的话，会减少与高尔基体的共定位（详细请参考原著论文）。
◆应用实例
通过蛋白组学全面分析回收蛋白
使用ERM (100 nM)处理HeLa细胞后，破碎细胞制备细胞裂解液。在裂解液中加入标签捕获抗体，使用Protein A磁珠进行免疫沉淀回收标记蛋白。将回收的蛋白通过SDS-PAGE分离后，切出每个条带，在凝胶中用胰蛋白酶/ Lys-C消化制备LC/MS样品。通过MS分析鉴定出共146种蛋白，其中63种蛋白是数据库上的ER蛋白，或是个别论文中确认了ER驻留的蛋白。73种蛋白作为细胞膜、细胞外分泌蛋白以及高尔基体蛋白被鉴定出来，它们都是存在于细胞外分泌路径的蛋白。由于存在于细胞外分泌途径的蛋白会途经ER，当这些蛋白在ER的时候便会被标记。因此，检测出来的蛋白中ER蛋白与途经ER的蛋白约占93%。本实验中检测出与ER无关的蛋白有10种，约占7%。
R应激引起的ER驻留蛋白变动量的定量评价
通过SILAC定量分析法分析ER应激诱导的ER驻留蛋白的变动量。准备两份细胞，一份在SILAC Heavy标记培养基中培养，另一份在Light标记培养基中培养。在Heavy标记培养基的细胞中添加ER应激诱导试剂Tunicamycin培养4 h。而Light标记培养基无需任何处理培养4 h。之后，使用ERM（100 nM）处理1 h，分别制备细胞裂解液，再以1:1的比例混合。通过免疫沉淀法回收混合裂解液中的标记蛋白，然后与上述实验一样，制备LC/MS用样品。检测出了87种可相对定量的蛋白，再通过SILAC法算出由ER应激引起的变动量。其中6种蛋白因ER应激在ER上的存在量增加了两倍以上。
◆产品列表
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| FDV-0039 | ER-Protein Capture Kit | 1 Kit |
特异性标记、纯化ER驻留蛋白的试剂盒
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