C1100 基因工程试剂 DH5α感受态细胞

基因工程试剂 DH5α感受态细胞
货 号：C1100
规 格：10×100ul / 20×100ul
保 存：-70℃保存，运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存少一年，-70℃保存少6个月。

产品简介：
    本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制备得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19 质粒检测，转化效率可达 10 8 ，-70℃保存 3-5 个月转化效率不发生改变。
    基因型: supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特 点: 一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的产物可与 pUC 载体编码的 β-半乳糖苷酶氨基端实现 β 互补，可用于蓝白斑筛选。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100ul 感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的 DNA 的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置 30 分钟。
3、将离心管置于 42℃水浴中 60-90 秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，注意不要摇动离心管。
4、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的 SOC 或 LB 培养基，37℃ 180rpm 振荡培养 1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的 DNA 总量较多，可取 100ul 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA总量较少，可取 200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事项：

1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。
2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA 或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
3、转化时，转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到低。

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相关文献：

《Production of l-alanyl-l-glutamine by immobilized Pichia pastoris GS115 expressing α-amino acid ester acyltransferase》 作者:Yi-Min Li, Jiao-Qi Gao, Xu-Ze Pei, Cong Du, Chao Fan, Wen-Jie Yuan and Feng-Wu Bai 期刊:Microbial Cell Factories 影响因子:4.402 PMID:30711013
 

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