Human TNF-α ELISA Kit

Human TNF-α ELISA Kit是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆、细胞或组织裂解液、或细胞培养上清液中的IL-1β的ELISA试剂盒。
      本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，zui小检出量为2.2pg/ml，与人IL-1rα、IL-1sRII、IL-1sRI、小鼠IL-1α、小鼠IL-1β等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
      IL-1即白细胞介素-1(简称白介1)，其家族由IL-1α(也称IL-1F1)、IL-1β(也称IL-1F2)、IL-1受体拮抗剂(IL-1 receptor 
antagonist, 简称IL-1RA, 或IL-1F3)及IL-18、IL-33和IL-1F5~F10组成。IL-1主要由巨噬细胞产生，此外几乎所有的有核细胞，如B细胞、NK细胞、体外培养的T细胞、角质细胞、树突状细胞、星形细胞、成纤维细胞、中性粒细胞、内皮细胞以及平滑肌细胞均可产生IL-1。正常情况下只有皮肤、汗液及尿液中含有一定量的IL-1，绝大多数细胞在受到外来抗原或细菌内毒素刺激后才能合成和分泌IL-1。IL-1β在免疫和炎症反应、骨重建(bone remodeling)、发烧、碳水化合物代谢等生理、病理过程中都有重要作用。血液中的IL-1主要是由单核细胞和巨噬细胞所产生的IL-1β。
      IL-1α和IL-1β在结构上有一定的相似性并且在氨基酸水平有25%的同源性。两者由不同的基因分别编码产生约31kDa大小的前体蛋白，并分别剪切成约17.5kDa大小的成熟蛋白。IL-1α的前体蛋白有一定的生物活性，而IL-1β的前体蛋白几乎没有生物学功能，所以其被Caspase-1/ICE剪切得到成熟的IL-1β是一个非常关键的步骤。在大多数情况下，IL-1α和IL-1β以同样的亲和力结合于相同的细胞表面受体，发挥相同的生物学作用。IL-1有两种跨膜受体蛋白，一种是分子量约为80kDa的IL-1 RI (IL-1 
receptor, type I)，其主要表达在T细胞、成纤维细胞、角质细胞、内皮细胞、滑膜细胞、软骨细胞及肝细胞中；另一种是分子量约为68kDa的IL-1 RII (IL-1 receptor, type II)，其主要表达在B细胞、嗜中性粒细胞及骨髓细胞中。
      IL-1主要激活NF-κB信号通路调控炎症因子的表达。IL-1和其受体结合后，激活下游一系列蛋白如JNK、p38、ERK1/2，及NF-κB和c-Jun。IL-1的信号通路见图1。

Human TNF-α ELISA Kit采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中靶蛋白的的浓度，其原理见图2。靶蛋白特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的靶蛋白会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗靶蛋白抗体后，生物素化抗靶蛋白抗体与靶蛋白结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。zui后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。靶蛋白浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图2. 双抗体夹心ELISA原理图。

      一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：
产品编号    产品名称    包装
PI305-1    人IL-1β抗体预包被板    8孔×12条
PI305-2    样品分析缓冲液    5ml
PI305-3    标准品稀释液    10ml
PI305-4    人IL-1β标准品    2-4瓶
PI305-5    人IL-1β生物素化抗体    10ml
PI305-6    辣根过氧化物酶标记Streptavidin    10ml
PI305-7    洗涤液(20X)    30ml
PI305-8    TMB溶液    10ml
PI305-9    终止液    5ml
PI305-10    封板膜(透明)    2张
PI305-11    封板膜(白色)    2张
－    说明书    1份
Human TNF-α ELISA Kit保存条件：
      除标准品外，4℃保存6个月内有效。标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效。注意TMB溶液避光保存。
注意事项：
      由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
      洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶*溶解后再配制工作液。
      为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
      TMB对人体有刺激性，请注意适当防护。
      如果发现TMB辣根过氧化物酶显色液出现混浊或颜色变成蓝色，应该停止使用。
      加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
      不宜混用不同批号的试剂盒组份，每批次试剂盒均经过独立测试。
      充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
      本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致zui终检测到的吸光度显著下降。
      洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
      检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
      加样过程中须避免气泡的产生。
      Human TNF-α ELISA Kit仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。