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| 供货周期 | 现货 | 规格 | 100管/96样 50管/48样 |
|---|---|---|---|
| 货号 | EY-01S153 | 应用领域 | 生物产业 |
| 主要用途 | 仅用于科研 |
产品简介
详细介绍
商品属性：
产品名称：丙二醛（MDA）生化检测试剂盒
规格：100管/96样 50管/48样
货号 : EY-01S153
测试方法:微量法 可见分光光度法
分类：氧化与抗氧化系列
商品详情：
测定意义：
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。
测定原理：
MDA与硫代酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在532nm有最大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定600nm下的吸光度，利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；16000g， 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
ADH测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三在25℃水浴中保温30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL样本上清液、800μL试剂三和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
3、操作表：
试剂名称（μL） | 测定孔 |
样本 | 20 |
试剂二 | 760 |
试剂三 | 10 |
试剂四 | 10 |
将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和反应1min后的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
注意：若A1-A2大于0.5，需将样本用提取液稀释，使A1-A2小于0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
NAD-MDH活力单位的计算：
1、血清（浆）NAD-MDH活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=6430×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（2000×V样÷V样总）÷T=3.215×ΔA
V反总：反应体系总体积，8×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；2000：细胞或细菌总数，2000万。
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