人(HD)ELISA试剂盒操作步骤

　　人组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法操作，全程时长约2-3小时，以下是完整标准操作流程：

　　实验前准备

　　试剂盒从2-8℃取出，在室温20-25℃下‌平衡15-30分钟‌，浓缩洗涤液若有结晶，温水浴溶解后再使用。

　　按1:20或1:30的比例，用蒸馏水将浓缩洗涤液稀释成工作液。

　　提前将血清、血浆、组织匀浆等待测样本1000×g离心10-20分钟，取澄清上清，样本不能含叠氮钠，避免抑制HRP酶活性。

　　对标准品进行倍比稀释，配制出梯度浓度的标准品系列，预留空白孔、阴性对照孔。

　　操作步骤

　　加样‌：依次在微孔中加入梯度标准品、待测样本各100μL，封板膜覆盖后，37℃温育‌60分钟‌。

　　洗涤‌：弃去孔内液体，拍干后每孔加满洗涤液，静置1分钟后弃去，重复洗涤‌5次‌，最后拍干孔内残留液体。

　　加酶标抗体‌：每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，重新覆盖封板膜，37℃温育‌60分钟‌。

　　再次洗涤‌：重复上述5次洗板操作，去除未结合的游离抗体。

　　显色‌：每孔依次加入底物A、底物B各50μL，轻轻混匀，37℃避光显色‌15分钟‌。

　　终止与读数‌：每孔加入终止液50μL，此时蓝色反应液转为黄色，15分钟内用酶标仪在‌450nm波长‌下测定各孔的OD值。

　　结果计算

　　以标准品的浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制标准曲线，根据样本的OD值在标准曲线上查出对应浓度，若样本前期做过稀释，最终结果乘以稀释倍数，得到样本中HD的实际含量。

　　关键操作注意事项

　　严格按说明书标注的时间、加液量执行温育操作，不要随意延长或缩短温育时长。

　　实验全程避免孔间交叉污染，不用的剩余板条立即放回自封袋密封，2-8℃干燥保存。

　　所有液体组分使用前充分摇匀，禁止剧烈涡旋震荡，避免产生大量气泡影响读数。

　　注：以上科研产品资料供参考!

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