ELISA包被的核心原理是利用抗原或抗体通过物理吸附(疏水作用)或化学共价键固定在固相载体(如聚苯乙烯酶标板)表面,形成稳定的固相免疫检测平台
。
物理吸附是主要方式,依赖蛋白质分子疏水基团与载体表面疏水基团间的非特异性结合,其效果受蛋白质分子量、等电点、浓度等影响
。对于难以吸附的小分子抗原(如半抗原、短肽)或脂类物质,常需通过间接包被(如与载体蛋白结合)或特殊处理(如有机溶剂溶解后干燥)来实现固定
。
包被质量直接影响实验效果,需严格控制包被缓冲液pH(如pH9.6的CBS)、抗原浓度(如5μg/ml)及孵育条件(室温/4℃/37℃过夜)
。高质量的包被能确保后续抗原抗体反应的特异性和信号检测的准确性。
注:以上仅供参考!
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