手机版
化工仪器网手机版
化工仪器网小程序
官方微信
公众号：chem17
扫码关注视频号
具体的提取步骤如下:
1.样品加氯仿分层后,移去上层水相（该水相里就是RNA，可照常继续进行RNA的提取）,加0.3ml乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA，涡旋混合，室温放置3分钟，2-8℃不超过2000×g离心5分钟。【注：这一步同时可以除去未*消化的残渣】
2.小心吸出沉淀后的上清，加1.5ml异丙醇沉淀蛋白质。室温放置10分钟，2-8℃12000×g离心10分钟弃上清。
3.加2ml含0.3M盐酸胍的95%乙醇洗涤蛋白质沉淀。室温放置20分钟，2-8℃7500×g离心5分钟，弃上清，重复两次。【注：不太清楚为什么这个时候用这么强烈的变性剂？防止蛋白降解？】
4.用2ml无水乙醇同样方法再洗一次。
5.真空抽干蛋白质沉淀5-10分钟，用1%SDS溶解蛋白质，反复吸打，50℃温浴使其*溶解，不溶物2-8℃10000×g离心10分钟除去。分离得到的蛋白质样品可用于Western Blot或-5至-20℃保存备用。【注：无水乙醇很容易挥发，所以几分钟就能抽干；没有真空抽干机也无所谓，把无水乙醇倒掉，开盖子静置几分钟就行了。这一步干燥千万不能太干了，否则溶解的时候很不爽——很难溶解.我是在50度水浴中过夜，或者每水浴30分钟就放在超声清洗机里清洗10分钟——虽然不是专门用来粉碎细胞的超声，但毕竟是超声波哦，还是蛮有效果的。
注意事项：
1.以上各试剂的用量都是以1mLTrizol为准，Trizol体积变化，各试剂用量随之等比例变化。
2.蛋白质沉淀可保存在含0.3M盐酸胍的95%乙醇或无水乙醇中2-8℃一个月以上或-5至-20℃一年以上。
3．这一步可省去：用0.1% SDS在2-8℃透析三次，10000×g离心10分钟取上清即可用于Western Blot。
常见问题分析：
得率低：
A.样品裂解或匀浆处理不*
B．zui后得到的蛋白质沉淀未*溶解
蛋白质降解：组织取出后没有马上处理或冷冻
电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分
相关产品
免责声明
- 凡本网注明“来源：化工仪器网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：化工仪器网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源（非化工仪器网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
采购中心
