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大鼠脑组织石蜡切片的操作步骤
在取材前一般要对大鼠进行灌注。
石蜡的过程如下：
1. 前固定：脑组织经心脏灌流进行前固定——麻醉动物，暴露心脏，从左心室灌注生理盐水或0.1M PBS几百毫升（一般为动物体积2－3倍），同时在右心房剪一口。然后再灌注几百体积4％多聚甲醛等固定液。
2. 后固定：取脑，置于固定液中后固定液24小时。
3. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精依次：（注意：高浓度酒精时间不能太长，否则组织易碎。）70%酒精可过夜 80%酒精2小时 95%酒精1小时两次 100%酒精1小时两次。（50%酒精6小时,70%4小时,80%4小时,90%过夜，95%1.5小时x 4次 无水1.5小时x4次）
4. 透明: 1：1的酒精和二甲苯1小时 常用二甲苯, 一般浸泡30－45min即可。（二甲苯透明 10分x4次）
5. 浸蜡: 组织经透明后放入熔化的软蜡（熔点为52－54℃）内，2小时；然后入硬蜡（熔点56－58℃）2－3小时。 6.包埋: 将熔化的石蜡倒入包埋框再将组织块放入，放入时不能有气泡.（ 注意：1.包埋面必须平整，否则不好切片！2.建议石蜡反复融化几次，以使其变得更加致密，便于以后切片。）
7.切片：组织厚度2mm 建议：大鼠脑大，若不影响实验可切开。
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灌注方法一般是经升主动脉灌注，先用生理盐水（37℃）快速灌注5min（60 ml）左右以移除血液，或者先用冰冷pbs灌注，针头扎在左心室，右心房剪开，直到肝脏发白（防止残留的血液导致非特异性染色）。然后用4％多聚甲醛0.1M磷酸缓冲液（pH 7.4）（4℃）400ml－500ml灌注固定，直到动物的肝脏发硬，尾巴僵直。完成灌注。动物放置4度冰箱保存2小时，然后取脑，继续保存在4%多聚甲醛/pbs中4度冰箱过夜（不要超过24h），第二天转移至30%蔗糖脱水至沉低。然后做病理试验（中性福尔马林固定24h内脱水石蜡包埋）。
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