赛默飞液相色谱仪作为分析化学领域的核心工具,凭借其高效分离能力和精准检测性能,广泛应用于药物研发、环境监测及食品安全等领域。其核心原理基于混合物中各组分在固定相与流动相间的分配系数差异,通过高压驱动流动相携带样品流经色谱柱,实现组分的物理分离。检测器将洗脱后的化合物转化为电信号,最终生成以保留时间为横轴、检测器响应值为纵轴的色谱图。
一、操作流程:标准化与精细化并重
1.流动相配制与脱气
选用色谱纯溶剂(如乙腈、甲醇)按比例混合,经0.45μm微孔滤膜过滤后,通过超声脱气10—20分钟以消除气泡。例如,含缓冲盐的流动相需延长脱气时间至5分钟,避免泵送过程中产生气泡干扰。
2.色谱柱平衡与样品预处理
根据分析目标选择C18、硅胶等填料类型的色谱柱,以1.0mL/min流速用流动相平衡30—60分钟,期间监测基线稳定性。样品需过滤去除颗粒物,酸性样品可添加1%醋酸改善峰形,碱性样品则加入10—20mmol/L三乙胺减少拖尾。
3.仪器初始化与参数设置
依次启动泵、进样器、柱温箱及检测器电源,通过Chromeleon CDS软件设置流动相比例(如A:B=40:60)、流速(0.2—2.0mL/min)及检测波长(如230nm)。对于梯度洗脱,需定义多阶段溶剂比例变化程序。
4.进样分析与数据采集
将标准品与样品置于自动进样器,启动序列分析。系统自动完成进样、分离及检测,生成色谱图后,利用软件积分功能处理峰面积与保留时间数据。若出现拖尾峰,需调整流动相pH或更换色谱柱。
5.关机维护与色谱柱保护
分析结束后,先用甲醇-水(5:95)冲洗色谱柱30分钟,再用100%甲醇冲洗30分钟以去除残留物。关闭软件后,依次关闭各模块电源,并填写使用记录。日常维护包括每日用稀硝酸清洗过滤器、定期反冲色谱柱(如异丙醇-二氯甲烷1:1混合液)以延长寿命。
二、技术优势:创新驱动分析效能
赛默飞液相色谱仪通过集成四元高压溶剂混合技术、智能流速控制及生物兼容性设计,实现从常规分析到高通量筛查的全场景覆盖。例如,Vanquish Horizon UHPLC系统配备1.5μm实心核粒子色谱柱,结合双模式恒温控制,可在1200bar压力下实现亚2分钟级分离,显著提升实验室产出效率。其与Orbitrap质谱仪的联用,更将检测灵敏度提升至200fg级别,满足复杂基质中痕量组分的精准定量需求。
从原理到操作,赛默飞液相色谱仪以科学严谨的设计与智能化软件支持,为分析化学研究提供了可靠的技术保障。通过标准化流程与精细化维护,用户可较大化发挥仪器性能,推动科研与产业应用的深度融合。
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