BioProE细胞冻存液（不含蛋白、DMSO和血清）使用方法

BioProE细胞冻存液（不含蛋白、DMSO和血清）使用方法

BioProE细胞冻存液基于控冰冻存技术，由明确化学成分组成，不含有胎牛血清和动物源成分、DMSO、和其他蛋白质类物质。自主研发控冰保护成分能够使细胞复苏后存活率达到90%以上。目前已验证的常用细胞系包括CHO、HEK 293、NS-1、5637、A549、HUH7、HepG2、VERO、MDCK、293T、marc-145、pk-15。也可用于常见原代细胞的冷冻保存。

细胞冻存步骤

1、常规方法收集对数生长期且细胞活率大于90%的贴壁细胞或悬浮细胞置于离心管中。

2、根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。

3、将离心管放入离心机中以1,000rpm的转速离心5分钟。离心后吸弃上清液，保留细胞沉淀。

4、加入1-2mL的细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度约为 5×10⁵ -1×10⁷ /ml。轻柔地混匀细胞，制成细胞混合液。

5、分装于已标记的冻存管中。

6、直接放入-80℃超低温冰箱中，可保存一年。

7、如果想长期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天时间，方可移至液氮罐中保存。

冻存细胞复苏步骤

1、从-80℃冰箱或液氮中取出冻存的细胞，立即置于37℃水浴锅中快速融化。

2、待冻存管中的细胞混合液wan全融化后转移到无菌离心管中，立即加入等体积的细胞wan全培养基与细胞混合，1,000rpm离心5分钟，移除上清液，收集细胞沉淀。

3、加入适量的wan全培养基，沿着管壁缓缓加入细胞沉淀中，轻柔混匀，将混匀好的细胞移至事先准备好的培养瓶中。

4、镜检观察，待细胞状态恢复后可进行其他研究或者培养处理。