微生物检测中出现异常现象平板如何进行菌落计数？

百欧博伟生物：在微生物检测中，遇到异常现象平板（如菌落过度蔓延、污染、菌落形态异常或培养基异常等）时，需采用特殊方法进行菌落计数。以下是具体处理步骤和注意事项：

一、确认异常现象类型

1、菌落过度蔓延

现象：菌落连成一片，无法区分单个菌落。

原因：菌种扩散性强（如变形杆菌）、培养基过湿、接种量过大。

2、菌落形态异常

现象：目标菌与非目标菌形态差异大（可能为污染）。

3、培养基异常

现象：培养基变色、浑浊、沉淀或干裂。

4、菌落密度异常

现象：菌落过密（>300 CFU/平板）或过疏（<10 CFU/平板）。

二、异常平板的处理与计数方法

1、菌落过度蔓延

分区计数法：

选择蔓延区域边缘的分散菌落进行计数，仅统计独立菌落。

若蔓延区域占平板面积>50%，需报告为“蔓延菌落”（TMTC：Too Many To Count），并重新稀释样品。

表面灭菌法（特定菌种）：

覆盖一层无菌琼脂（45-50℃）固定菌落，冷却后计数下层分散菌落。

2、疑似污染或菌落形态异常

选择性培养基验证：

将可疑菌落转接到选择性培养基（如EMB、SS琼脂）确认是否为非目标菌。

染色鉴定：

使用革兰染色、芽孢染色等辅助判断，排除污染菌。

计数原则：

仅计数符合目标菌特征的菌落，其余标记为污染并记录。

3、培养基异常

物理干扰（如沉淀）：

使用立体显微镜或倾斜平板观察，排除沉淀干扰。

化学干扰（如颜色变化）：

通过空白对照比对，确认是否为菌落代谢产物导致的变色。

4、高密度或低密度菌落

高密度（>300 CFU）：

报告为“不可计数”，选择更高稀释度的平板重新计数。

低密度（<10 CFU）：

结合多个稀释度计算加权平均值，或按检测下限报告（如“<10 CFU/mL”）。

三、特殊情况处理

1、菌落重叠但可辨：

统计所有可见独立菌落，相邻菌落间距<2 mm时按1个计算。

2、链状菌落：

视为单个菌落（除非明显由多个菌体形成）。

3、微型菌落（<0.5 mm）：

使用立体显微镜（10-15倍放大）辅助计数。

四、记录与报告

1、明确标注异常现象：

记录平板状态（如“蔓延生长”“疑似污染”）。

2、计算公式调整：

若仅部分稀释度可用，需注明数据来源（如“基于10⁻⁶稀释度计数”）。

3、结果有效性说明：

异常平板数据需备注可能误差，必要时重新实验。

五、预防措施

优化稀释度：对未知样品进行梯度稀释（建议3个连续稀释度）。

控制接种量：确保每平板菌落数在30-300 CFU之间。

使用抑制扩散剂：添加TTC（氯化三苯基四氮唑）或0.1%脱氧胆酸钠抑制蔓延。

严格无菌操作：避免污染导致的假阳性/阴性。

六、注意事项

若异常平板无法准确计数，需重新制备样品并复测。

参考标准：遵循ISO 7218、FDA BAM或实验室内部SOP要求。

通过以上方法，可在异常情况下限度保证菌落计数的科学性和准确性。

北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。

除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！