大鼠皮层神经元细胞 百欧博伟生物 原代细胞

大鼠皮层神经元细胞 百欧博伟生物 原代细胞

大鼠皮层神经元细胞 百欧博伟生物 原代细胞

一、基本信息

平台编号：bio-73730

产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

产品名称：大鼠皮层神经元细胞

组织来源：脑组织

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

二、细胞简介

大鼠皮层神经元细胞分离自脑皮层组织；皮层神经元细胞是构成中枢神经系统结构和功能的基本单位。神经元是具有长突触（轴突）的细胞，它由细胞体和细胞突起构成。在长的轴突上套有一层鞘，组成神经纤维，它的末端的细小分支叫做神经末梢。细胞体位于脑、脊髓和神经节中，细胞突起可延伸至全身各器官和组织中。细胞体是细胞含核的部分，其形状大小有很大差别，直径约4-120微米。核大而圆，位于细胞，染色质少，核仁明显。细胞质内有斑块状的核外染色质，还有许多神经元纤维。细胞突起是由细胞体延伸出来的细长部分，又可分为树突和轴突。每个神经元可以有一或多个树突，可以接受刺激并将兴奋传入细胞体。每个神经元只有一个轴突，可以把兴奋从胞体传送到另一个神经元或其他组织，如肌肉或腺体。皮质神经元是大脑皮质的主要组成细胞之一，是大脑进行功能活动调节的基本单位，参与动物多种中枢神经系统疾病的病理过程。通过形态学观察显示神经元从贴壁、伸出突起开始；突起逐渐增多，而后突起进一步增多并逐渐成网，同时细胞胞体增大，周边光晕明显。10-12d细胞丰满，随后神经元开始裂解，突起逐渐减少，细胞已退化变性，轮廓模糊，光晕消失，细胞变形。 本公司生产的大鼠皮层神经元细胞采用消化法结合神经元专用培养基培养、化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经MAP-2免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

三、培养基信息

Neurobasal-A、B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等。我们推荐使用大鼠皮层神经元细胞专用培养基（产品货号：CM-R105）作为体外培养大鼠皮层神经元细胞的培养基。

四、液体配制

硼酸硼砂缓冲液：0.05M四硼化钠45ml，0.2M硼酸55ml，pH8.4；

－EDTA消化液：－0.125g；EDTA－0.2g；D-Hanks平衡盐液定容至100ml

所用的培养板、培养瓶或玻片预先经100μg/L多聚赖氨酸硼酸盐缓冲液于37℃包被4h，三蒸水洗三遍晾干备用。

五、操作步骤如下

1、孕16d SD大鼠经麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks平衡盐液中。

2、在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm3大小，加入-EDTA消化液并放入37℃孵箱内消化20min，中间摇晃一次。

3、随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液（DMEM＋10％FBS）的离心管内终止消化液作用5min。

4、用滴管吸出组织转移到装有预冷的DMEM＋10％FBS的离心管内，用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次，静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤2～3次。

5、将所收集的上清经200目筛网过滤。

6、过滤后的细胞悬液于800r/min离心5min，弃上清，管内加入新鲜培养液（DMEM＋20％FBS）并吹打成单细胞悬液。

7、细胞计数，调整细胞密度按1.5×105/cm2种入6孔板内，放入CO2孵箱中培养。培养48h后换液并加入Ara-C使其终浓度为1×10-5mM/L。Ara-C作用24h后全量换液。以后每隔3天半量换液一次。

六、注意以下几点

1、上面的步骤是传统方法。有许多地方可以进行改动：如消化时可以直接用0.125－0.25的消化15－20min左右，也可用DNA酶进行消化，有人还直接进行吹打，都可行。

2、上面虽然时大鼠皮层神经元，但是同样适用于小鼠，但是应该选择 孕13d 左右的小鼠。

3、神经元是一种比较难培养的细胞，因此在接种时细胞的密度一定要够！

4、在玻片上培养神经元时，一定要注意玻片的来源和处理方法，这个非常重要，对神经细胞的影响是很大的。如果您现在在玻片上培养的神经元生长情况还不错的话，那么您在以后的培养中还是用同一来源（厂家）的玻片。

5、如果有B27和neurobasal培养基，那么就方便了（不用加AraC）--

（1）把细胞悬液用（DMEM＋20％FBS）悬浮，种到培养皿上6－12h后，全量换成2％B27的neurobasal培养基，继续培养，3d半量换液。

（2）把细胞悬液用直接用2％B27的neurobasal培养基悬浮接种。

（3）可以用新生1d内的胎鼠皮层直接培养。

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