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超高效液相色谱仪标准化操作流程与技术要点解析

来源：上海分析仪器销售中心第一营业部 2025年05月18日 01:50

　　超高效液相色谱仪作为现代实验室的核心分析设备，其规范操作直接影响检测数据的可靠性。本文将从仪器准备、参数设置到日常维护全流程解析操作规范，为实验人员提供标准化操作指南。

　　一、开机前准备与系统检查

　　1.环境要求确认：实验室温度需稳定在20-25℃，湿度控制在40%-60%，避免阳光直射与震动干扰

　　2.气源压力检查：设定流动相脱气机压力为0.3-0.4MPa，确认氦气纯度

　　3.溶剂系统准备：使用HPLC级溶剂，按照标准比例配置流动相（如A：水含0.1%甲酸，B：乙腈含0.1%甲酸），使用0.45μm滤膜过滤后超声脱气15分钟

　　二、系统初始化与平衡

　　1.管路冲洗程序：依次用甲醇/水(60:40)冲洗泵、进样阀、色谱柱60分钟

　　2.压力测试确认：设置流速0.5 mL/min，观察基线稳定性，确保压力波动＜±2%（如Waters ACQUITY H-Class）

　　3.波长校准：以氘灯/钨灯为光源，校准检测器在254nm处的吸收值（误差＜±1nm）

　　三、进样操作规范

　　1.样品预处理：固体样品需制成0.2-1.0 mg/mL浓度，经过0.22μm滤膜过滤；生物样品需酶解处理

　　2.进样器维护：每批次分析后用流动相清洗进样针5次，每周用65%硝酸浸泡30分钟

　　3.进样量控制：梯度洗脱时进样体积＜10μL（如Agilent 1290 Infinity II），等度洗脱可适当增加至20μL

　　四、检测参数优化

　　1.梯度洗脱程序：水相与有机相比例需线性变化，如0-5min(20:80)至20min(80:20)，切换时间差＜0.1min

　　2.流速控制：根据色谱柱规格调整（4.6×250mm柱适用1.0 mL/min，2.1×100mm柱适用0.3 mL/min）

　　3.检测波长选择：优先采用化合物最大吸收波长，必要时采用多波长检测（如UV 254nm/280nm双波长）

　　五、数据处理与结果验证

　　1.积分参数设置：峰宽阈值≥5s，斜率灵敏度10-20μV/s，拖尾因子≤1.5

　　2.定量方法验证：R2值＞0.999，回收率95-105%，RSD＜2%（n=5）

　　3.原始数据存储：按照GLP要求保存原始色谱图，保留时间差＜0.2min（重复性实验）

　　六、系统维护与安全规范

　　1.日常维护要点：

　　①每日检查密封圈状态，每周更换自动进样器转子密封

　　②每月超声清洗脱气机管路，每季度校验流速准确性

　　2.关机程序：

　　①用纯甲醇-水(50:50)以1mL/min冲洗系统30分钟

　　②保持柱温箱温度在10-15℃待机

　　3.安全注意事项：

　　①禁止超压操作（压力保护阈值设为30-35MPa）

　　②废液集中收集处理，避免有机溶剂泄漏

　　结语

　　通过严格执行上述操作规范，可使超高效液相色谱仪保持最佳运行状态。规范操作不仅保障数据准确性，更能延长系统使用寿命（正常达10年以上），为精准分析提供可靠技术支撑。

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