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PUREfrex®1.0于2011年推出，是基于PURE system开发的无细胞蛋白合成试剂盒，由转录、翻译、能量再生所需的蛋白和核糖体组成。
图2.PUREfrex®使用流程
PUREfrex®1.0使用方法（仅供参考）：
以20ul反应体系为例，如果需要扩大体积可以等比例增加对应试剂。
1. 在室温或37℃下保温1分钟使溶液I完-全融解，然后在冰上冷却。
2. 在冰上融化溶液II和溶液III。
3. 将溶液I，溶液II和溶液III 涡旋后简短离心收集管底内容物。
4. 根据下列表格配置反应液，每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。
Water | 8-X μL |
Solution I | 10μL |
Solution II | 1μL |
Solution III | 1μL |
Template DNA | X μL |
总体积 | 20ul |
5. 在37°C的heat block或水浴中反应 2~4 h，合成蛋白。
6. 分析合成蛋白。通过SDS-PAGE验证时，请用水稀释反应液后进行电泳。
试剂盒组分：
组分名称 | 组分内容 | 保存温度 |
Solution I | Amino acids, NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc. | -20℃ |
Solution II | Proteins in 30 % glycerol buffer | -20℃/-80℃ |
Solution III | Ribosome (20 μM) | -80℃ |
DHFR DNA | PCR product containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a positive control. (20 ng/μL) | -20℃ |
请注意：1.在打开试剂盒之前请将试剂盒储存在-80°C的温度下。2.溶液II和溶液III避免反复冻融。
产品信息：
货号 | 名称 | 规格 |
GFK-PF001-0.25-EX |
PUREfrex®1.0 | 1 x 250 µl |
GFK-PF001-2ML-EX | 2 ml | |
GFK-PF001-10ML-EX | 5 x 2 ml |
除了以上目录产品外，Cosmo Bio也能根据客户的需求提供定制的PUREfrex®1.0。PUREfrex®1.0的成分信息是公开的，您可以根据PUREfrex®1.0设计定制试剂盒。
PUREfrex®1.0组分
PUREfrex®1.0 Solution I (Buffer, Salts, Substrates)组分 |
Hepes-KOH pH 7.6 |
Potassium glutamate |
Magnesium acetate |
Spermidine |
Dithiothreitol |
10-Formyl-tetrahydrofolate |
4 NTPs |
20 Amino acids |
Creatine phoshate |
tRNA mixture |
PUREfrex®1.0 Solution II (Proteins)组分 |
20 Aminoacyl-tRNA synthetases (ARS) |
Methionyl-tRNA transformylase (MTF) |
3 Initiation factors (IF1, IF2, IF3) |
3 Elongation factors (EF-Tu, EF-Ts, EF-G) |
3 Release factors (RF1, RF2, RF3) |
Ribosome recycling factor (RRF) |
T7 RNA polymerase |
Nucleoside diphosphate kinase (NDK) |
Adenylate kinase (ADK, myokinase) |
Ceatine kinase (CK) |
Pyrophosphatase (PPiase) |
PUREfrex®1.0 Solution III组分 |
Ribosome |
定制应用举例
（-）RF1 | 用于通过如下图所示的琥珀抑制合成含有非天然氨基酸的蛋白质。 |
（-）T7 RNA polymerase | 可用于检测其他RNA聚合酶性能，如大肠杆菌RNA聚合酶。 |
（-）特异性氨基酸和（或）20种氨酰tRNA合成酶 | 用于合成含非天然氨基酸或少于20个氨基酸的蛋白质。 |
图3.琥珀抑制途径合成含有非天然氨基酸的蛋白质示意图
当您的蛋白质需要分子伴侣的帮助或形成二硫键以形成正确的构象时，只需向PUREfrex®1.0中添加补充试剂即可。
分子伴侣-帮助蛋白正确折叠，合成可溶形式蛋白质
产品货号 | 产品名称 | 规格 |
GFK-PF003-0.5-EX | DnaK Mix | 500 µl Equivalents |
GFK-PF003-10ML-EX | DnaK Mix | 5 x 2 ml Equivalents |
GFK-PF004-0.5-EX | GroE Mix | 500 µl Equivalents |
GFK-PF004-10ML-EX | GroE Mix | 5 x 2 ml Equivalents |
帮助形成二硫键的添加物
产品货号 | 产品名称 | 规格 |
GFK-PF005-0.5-EX | DsbC Set | 500 µl Equivalents |
GFK-PF005-10ML-EX | DsbC Set | 5 x 2 ml Equivalents |
GFK-PF006-0.5-EX | PDI Set | 500 µl Equivalents |
GFK-PF006-10ML-EX | PDI Set | 5 x 2 ml Equivalents |
更多产品详情请联系Cosmo Bio中国授权代理-欣博盛生物
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