RetroBeads Gamma Lumafuor操作说明

来源：上海牧荣生物科技有限公司 2025年02月06日 14:48

1、包装和稀释:

将Lumafuor的珠粒包装在密封的小瓶中，并将浓缩的珠粒悬浮在蒸馏水中。如果用红色珠子作为神经通路的反向示踪，推荐采用稀释法:在不降低珠子荧光标记强度和质量的情况下，可在大鼠视皮层使用1:4稀释。但对于第一次实验，我们不建议使用稀释的珠子，而是使用原液进行注射示踪。除了蒸馏水，常规的盐溶液如氯化钠和KCl也可以用作稀释剂。如果使用绿珠，强烈建议使用未经稀释的原液。

2、存储:

为了避免蒸发，珠溶液应存放在4度冰箱中。不要冷冻它！冻豆会没用，不能用。干燥后的珠子也不能使用(不能重新悬浮)，产品没有明显的使用寿命。如果按要求储存，可以储存几年。

3、注射:

珠子最好使用压力注射，如1ml汉密尔顿微量注射器或气动注射系统。如需小面积微量注射(30-50nl)，可采用末端直径30-50um的玻璃电极进行注射，直径较大的玻璃电极可用于常规反向示踪(注射体积0.1-0.3ul)。然而，即使在较高的剂量下，珠子也不会从注射部位显著扩散(通常小于1 mm)。因此，为了尽可能完整地标记投射到更大核的神经元，需要多点注射。尽管磁珠带负电荷，但不建议使用离子渗透法来示踪磁珠。

4、存活时间:

在大多数恒温脊椎动物系统中，检测珠子的最短有效时间是24小时。在48小时内，标记强度随注射时间增加，48小时后荧光强度保持不变。在冷血动物中，检测珠子的推荐时间是1周。目前还没有检测到珠子最长的可检测周期。然而，珠的荧光强度和质量可以在体内保持至少14个月不变，并且细胞可以被久标记。在动物或神经元中没有发现珠子的毒性作用。

5、固定和处理:

标准的固定方法是:0.1mpbs洗涤或灌注，固定在4%多聚甲醛中(0.1mpbs制剂，pH7.4)。用戊二醛固定会产生大量的组织自体荧光，会阻碍用珠子标记的神经元。而且在戊二醛固定组织中不会全观察到绿珠，应尽量避免。如果使用冰冻切片，切片应该用PBS冲洗，并用明胶包被的载玻片干燥。风干后，载玻片应在二甲苯中保持透明1分钟，然后用fluoromount或krystalon密封。Fluoromount可从Atomergic Chemetals Corp .，Farmingdale，NY获得；Krystalon来自新泽西州吉布森镇的Harleco (EM Industries)。

观察:

红珠里的染料是罗丹明，所以所有和罗丹明搭配的荧光滤镜都可以。尼康公司的一些老款罗丹明滤镜，由于背景较高，可能无法观察到荧光珠。一般蔡司和莱茨的标准罗丹明滤镜都能获得较好的观察效果。绿色荧光滤光片大部分都能很好的观察到四季豆的荧光结果。设置为荧光黄的滤镜可以获得很强的明亮荧光，但也带来了很高的背景干扰。结果表明，宽波段的荧光滤光片比窄带滤光片能获得更强的荧光信号。经过长时间的观察和拍照，珠子的荧光没有

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