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大鼠组胺（Histamine）酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒用于体外定量检测大鼠血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中组胺（Histamine）的含量。
使用目的
本试剂盒用于体外定量检测大鼠血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中组胺（Histamine）的含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠组胺（Histamine）水平。用纯化的大鼠组胺（Histamine）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入组胺（Histamine），再与HRP标记的组胺（Histamine）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的组胺（Histamine）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠组胺（Histamine）浓度。
注意事项
1. 本试剂盒仅用于科研，不得用于医学诊断。
2. 使用试剂盒前，请仔细阅读说明书，以试剂盒内的说明书为准，请务必理解说明书内容。
3. 酶标包被板属于可拆型，开封后如未用完，板条应装入铝箔袋密封并2-8°C保存。
4. 加样样本和试剂应尽快完成。
5. 为了让测试结果更准确，尽可能混匀酶标板孔中所加试剂，酶标板不能反复使用。
6. 避免实验过程中酶标板干燥；清洗后尽快加试剂。
7. 实验开始，所有试剂应平衡到室温 （21-26°C） 后方可进行。温度会影响吸光度值，但不影响样本值。
8. 切忌用口加样，以免试剂和样本粘到皮肤和粘膜上。
9. 不要在处理样本或试剂的区域抽烟、吃东西、喝酒或化妆。
10. 操作时带一次性手套，微生物的污染会影响实验结果的正确性。
11. 操作应按照国家规定的安全条列进行。
12. 过期的试剂盒切勿再使用。
13. TMB 底物对皮肤有刺激性，不慎入眼，立即用大量水冲洗，皮肤上不慎接触到也应立即用肥皂，并用大量的水冲洗。试验中被污染的物品在下次使用前应尽快清洗。
14. 配置的化学品或使用后的试剂，根据国家微生物安全条列都视为危险废物。
试剂盒组成
| 说明书 | 1 | |
| | 2 | |
| 酶标包被板 | 12孔×8条 | 2-8℃ |
| 标准 | 0.5ml×1 瓶 0 ng/ml 0.5ml×1瓶 0.3 ng/ml 0.5ml×1瓶 0.6 ng/ml 0.5ml×1瓶 1.2 ng/ml 0.5ml×1瓶 2.4 ng/ml 0.5ml×1瓶 4.8 ng/ml | 2-8℃ |
| 生物素标记的抗Histamine抗体 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 显色剂B液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 终止液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 2-8℃ |
需要而未提供的试剂和器材
1. 吸光度值在450nm波长下检测的酶标仪。
2. 1-2ml的加样器。
3. 100 ml和1L的量筒。
4. 吸水纸。
5. 37°C恒温箱。
6. 蒸馏水或去离子水。
7. 数据分析和绘图软件，图纸。
8. 标准和样品稀释的试管。
储存条件
1. 有效期内的试剂如开封后未用完，请2-8°C 保存。
2. 过期的试剂请不要用，打开后的试剂2-8°C 保存。
3. 酶标包被板必须2-8°C 保存，如有未用完的酶标包被板，打开的铝箔袋须密封并2-8°C 保存。
4. 开封后的试剂盒2-8°C只能保存8周。
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
样本处理及要求
血清-用采血管收集血液，室温血液自然凝固30分钟，1000 xg离心15分钟左右，收集上清，尽早进行实验，或者分装后-20°C或 -80°C 保存。
血浆-收集好的血浆根据要求选择EDTA或者肝素作为抗凝剂，2-8°C 1000 xg离心15分钟左右，30分钟内收集好，-20°C或 -80°C 保存，避免反复冻融。
细胞上清及相关液体-收集好的样本离心后应尽快实验，或者分装后-20°C或 -80°C 保存，避免反复冻融。
注意事项
1. 所有试剂和样本使用前必须在室温下平衡，混匀试剂时不应起泡沫。
2. 一旦实验开始，各操作步骤都应尽快完成。
3. 避免重复使用手中的吸头和试管，以免交叉污染。
4. 一般情况，酶的反应与时间和温度成正比。
操作步骤
1. 加标准品：在酶标包被板上设标准品孔，依次加入不同浓度的标准品50ul（建议每个浓度做2个平行孔）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品、生物素标记的抗Histamine抗体及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl，然后再加生物素标记的抗Histamine抗体10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行
实验结果计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。
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