胎鼠海马神经元的原代培养

一、背景
      海马是大脑颞叶内侧的一个解剖结构，因为形状类似海马称为海马体。海马体的主要组成基本单位是神经元，海马神经元的生理功能与人的记忆密切相关。一些疾病会使海马神经元出现损伤，比如常见的阿尔兹海默病、单纯疱疹病毒性脑炎、自身免疫性脑炎等等，如果这些疾病出现，就会导致记忆障碍，甚至痴呆的表现。
      神经细胞是近代神经学科中研究重点之一，神经细胞体外培养是指在体外模拟建立体内生长条件，使神经细胞或神经胶质细胞在其生存和生长并维持其形态和功能的方法。神经细胞体外培养技术已成为当今神经科学研究中的主要方法之一，与各种先进的技术结合在一起渗透到各个学科，但因神经细胞对体外培养条件要求条件较高难度大而又制约它的发展。

二、实验步骤
1.无菌条件下，从怀孕18天的SD大鼠腹中取出胎鼠，放在预冷的无钙、镁的HBSS平衡盐溶液中；                          
2.解剖显微镜下，看清海马结构，剥去海马上面的脑膜和血管；
3.加入0.05%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱内消化15分钟，每5分钟摇晃一次；
4.HBSS溶液洗三次；
5.在HBSS溶液中吹打10次左右，吹打过程中不能有气泡；
6.所收集的上清过滤后，将细胞悬液于4℃1000rpm离心10min ，弃上清，管内加入种植液1重悬；
7.台盼蓝染色计数，以 3 x 104cells/孔种入包被的24孔板，37℃，5%CO2，95%饱和湿度的培养箱中培养。4-6小时后，全量换种植液2；
8.每周换液两次，每次半量换液。

                                          1d                                                                                    7d