手机版
化工仪器网手机版
化工仪器网小程序
官方微信
公众号：chem17
扫码关注视频号
一、背景
神经元原代培养是将胚胎哺乳动物中枢神经系统的部分组织，如大脑皮层、海马、脊髓等脑组织直接取出，再接种培养的方法。目前国内、外有关神经元培养的方法较多，但在原代培养中神经元的纯度和产量方面还存在一些急待解决的问题。由于神经元是一种高度分化的细胞，相对于其它细胞而言，神经元在体外更难以存活和生长。因此，体外培养神经元要求的培养方法和营养条件均较为特殊。
神经细胞的体外培养技术是研究神经源性疾病的发病机制、进程的一个重要工具，能很好的、直观的反映离体神经元的发育状况和生理活性，如何建立一个稳定成熟的神经细胞培养体系是神经系统疾病体外实验研究顺利进行的基础。随着基础医学及临床医学研究的逐渐深入，神经细胞的体外培养技术在脑损伤、神经障碍性疾病、衰老相关神经疾病方面得到广泛重视和普及应用。
二、实验步骤
(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。
(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。
(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分钟振荡一次；
(4)去掉上清，加入终止液终止消化，吹打10-15次，不能有气泡，收集上清，剩余组织再消化一次。
(5)4℃1000rpm离心10min，弃上清，加入种植液1重悬，培养箱内差速贴壁30min；
(6)收集上清，台盼蓝染色计数，按6*105cells/孔种入六孔板(种植液1)，37℃，5%CO2，95%饱和湿度的培养箱中培养；
(7)培养第二天，全换液更换为种植液2；
(8)培养第四天，半量换液加入5uM的阿糖胞苷，24h全量换液；
(9)之后每周换液两次。
1d 7d
伊莱博生物科技（上海）有限公司是一家专注于生命科学领域研究，集生物技术和产品开发、技术咨询、技术服务、以及科研能力培训服务为一体的综合型高科技企业。目前已建成并投入使用的实验室面积近2800平方米，包含基础实验平台、组学实验平台以及动物实验平台，基本能够满足科研课题研究的全流程。
伊莱博生物拥有专业的技术支持和实验操作人员团队，核心成员来自中科院、复旦、交大、同济等国内重点高校及科研机构，能够提供前沿的、完善的实验技术咨询与服务。
为了响应国家大力发展基础研究的号召，推动实验科学领域的进步，伊莱博生物充分利用积累多年的科研资源优势，为广大科研工作者提供实验技术培训服务，从理论和实操两个部分，培养其科研思维以及解决问题的能力，为今后的科研工作奠定坚实的基础。
本文由伊莱博生物科技（上海）有限公司整理发布，如有转载，请注明出处！
免责声明
- 凡本网注明“来源：化工仪器网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：化工仪器网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源（非化工仪器网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
采购中心
