各种动物外周血中性粒细胞分离液试剂盒

规格：200 mL/kit 

保存：本产品对光敏感，应该室温

避光储存，保质期 2 年。无菌开封后，保存于室温。

试剂盒组成：  试剂A 200mL 试剂C 100mL 细胞洗涤液 200mL 红细胞裂解液 100mL

操作步骤：  1. 取新鲜抗凝全血，血液体积小于5mL时，在离心管中先加入4mL试剂A，后将2mL试剂C小心叠 加于试剂A之上，形成梯度界面（血液体积大于等于5mL，试剂A与试剂C比例2：1，试剂总量与稀 释后的样本量相等。但二者的总体积不能超过离心管的三分之 二，否则会影响分离效果），将血液平铺到分离液液面上方， 注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液， 然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将 形成明显的分层界面。如果样品较多，加样的时间较长，在离 心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。） 2. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（血液的体积 越大所需的离心力越大，离心时间越长，的分离条件需摸 索，离心转速不超过1200g）。 3. 离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细 胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层，如图所示（个 体差异或者是分离条件不同，粒细胞层可分离不明显）。 4. 用吸管小心吸取试剂C与试剂A之间以及试剂A中的中性 粒细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤 细胞。250g，离心10min（如有红细胞混杂则加入适量红细胞 裂解液）。 5. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心 10min。 6. 重复步骤6 7. 弃上清，细胞重悬备用。

注意事项：  A. 开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免 微生物污染。。 B. 分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是 分离示意图 血浆层 单个核细胞层 试剂 C 试剂 A 红细胞层 中性粒细胞层 温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。 C. 血液样本为新鲜抗凝血（采血2 h以内），为保持淋巴细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。 D. 血液样本不需稀释，直接进行分离即可。 E. 稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集， 大大降低细胞得率及纯度。 F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。 G. 血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸 索的分离条件。 H. 如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生 物污染。 I. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提 供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。