GV3101 菌株使用操作说明

产品说明

GV3101 菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif，为了便于转化操作，此菌

株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是

T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但

可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 质粒含有筛选标签：gent，

赋予 GV3101 菌株庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。本公司生产

的 GV3101 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301 质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

常规操作方法

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2. 每 100 μl 感受态加 1 μg（体积不大于 10 μl）质粒 DNA，用手管底混匀，依次于冰上静置 5 分钟、

液氮 5 分钟、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟。

3. 加入 700 μl 无抗生素的 LB 或 YEB 液体培养基，于 28℃振荡培养 2~3 小时。

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB

平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天

（当平板只含有 50 μg/ml kan 时，28℃培养 48 h 即可；平板中同时加入 50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，

需 28℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml rif 则需要 28℃培养 72-90 h）。

注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，

转化效率下降一个数量级。

2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。

4. 利福平浓度不应高于 25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司 GV3101

感受态计算转化效率时所用平板只含有 50 μg/ml kan，若所用平板含有 20 μg/ml rif 则转化效率降低到 1/2。

5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti 质粒丢

失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti 质粒丢失的概率极低 (可

以忽略)。