过氧化氢酶的活性测定

来源：上海嵘崴达实业有限公司 2011年08月01日 15:37

过氧化氢酶的活性测定——高锰酸钾滴定法

www.runwelltac.com

一、原理

过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

R（Fe²⁺）+H₂O₂⇒R（Fe³⁺+OH^-）

R（Fe³⁺+OH^-）₂+H₂O₂⇒R（Fe²⁺）₂+2H₂O+O₂

据此，可根据H₂O₂的消耗量或O₂的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量的H₂O₂溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H₂O₂。

5H₂O₂+2KMnO₄+4H₂SO₄⇒5O₂+2KHSO₄+8H₂O+2MnSO₄

即可求出消耗的H₂O₂的量。

二、仪器和用具

研钵；三角瓶50ml 4个；10ml酸式滴定管；恒温水浴锅；容量瓶25ml 1个。

三、试剂

10%H₂SO₄；

0.2mol/L磷酸缓冲液PH7.8；

0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO₄（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标定；

0.1Mol/L H₂O₂：市售30%H₂O₂大约等于17.6Mol/L，取30%H₂O₂溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1Mol KMnO₄溶液（在酸性条件下）进行标定；

0.1Mol/L草酸：称取优级纯H₂C₂O₂·2H₂O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1L。

四、方法

1. 酶液提取：取小麦叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000r/min离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。

2. 取50ml三角瓶4个（2个测定，2个对照），测定瓶中加入酶液2.5ml，对照瓶中加入煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H₂O₂，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H₂SO₄ 2.5ml。

3. 用0.1mol/L KMnO₄标准溶液滴定H₂O₂，至出现粉红色（在30min内不消失）为终点。

4. 结果计算：酶活性用每克鲜重样品1min内分解H₂O₂的毫克数表示：

酶活（Mg/g·Min）=（A-B）×VT×1.7FW×V1×t　　　　　　　（3-2）

式中：A：对照KMnO₄滴定毫升数（ml）；B：酶反应后KMnO₄滴定毫升数（ml）；VT：酶液总量（ml）；V1：反应所用酶液量（ml）；W：样品鲜重（g）；1.7FW：1ml 0.1mol/L的KMnO4相当于1.7mgH₂O₂。

五、注意

所用KMnO₄溶液及H₂O₂溶液临用前要经过重新标定。

凡本网注明“来源：化工仪器网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：化工仪器网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
本网转载并注明自其他来源（非化工仪器网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。

联系我们