做外泌体 Western Blot 鉴定吗？先来这看看 ！

       你是否还在为选用指标蛋白而彷徨？你是否还在纠结蛋白抗体哪家强？你是否还在为寻找阳性对照而迷茫？让我们走进文献，为你分析问题寻求方向！

1）外泌体Western blot鉴定时通常会检测哪些指标蛋白？

    根据22篇外泌体相关文献的统计，排在前4位的检测指标为CD63（13/22）、Tsg101(8/22)、 CD9和CD81并列第三位（6/22）；接着检测较多的4个指标为Alix（4/22）、 HSP70(3/22)、 flotillin (3/22)和Syntenin (2/22)；此外还有一些指标仅在1篇文献中出现过，例如HSP90、LAMP2B、LMP1、ADAM10、nicastrin、AChE、AQP2、RPL5、a-1AT。

    针对外泌体的定性检测至少选择两个指标就能满足文章发表需要了，比如检测CD63和Tsg101。

2, 外泌体Western blot鉴定时通常使用哪些公司的抗体？

    CD63 抗体的供应商：文献报道zui多的两个公司Abcam (ab68418和ab8219) 和Santa Cruz (sc-5275)，其他公司有Systems Biosciences Inc、Abnova (clone MEM-259)、BD Pharmingen (551458)。

    Tsg101抗体的供应商：文献报道zui多的两个公司Abcam（ab125011）和Santa Cruz （sc-7964），其他公司有Thermo Pierce和Sigma-Aldrich。

    CD9抗体的供应商：文献报道zui多的是Abcam (ab92726)，其他的公司有Santa Cruz和Systems Biosciences Inc。

    CD81抗体的供应商： 文献报道zui多的是Santa Cruz (sc-9158和H-121)，其他的公司有Novus Biologicals (Cat# NB100–65805)、ImmunoWay。

    Alix抗体的供应商：文献报道的公司有Cell Signaling (#2171)、Santa Cruz、Abcam。

    HSP70抗体的供应商：文献报道的公司有Abcam (ab19136)、Santa Cruz (sc-24)。

    flotillin抗体的供应商: 文献报道的公司有BD Bioscience。

Syntenin抗体的供应商：文献报道的公司有ThermoFisher Scientific (Cat# PA5-28826) 和Abcam (ab133267)。

    其他抗体信息请查阅附录整理的文献资料。

3， 外泌体Western blot定性检测中有没有阳性对照？

    从发表的文章来看，并没有一篇文章结果中提到了阳性对照样品，但是已经被文献报道的样品可以作为后人Western blot检测实验的阳性对照，通过这样阳性样品的检测来判断实验体系是否正常。罗列一下文献中的阳性对照样品：脂肪组织巨噬细胞外泌体、神经干细胞外泌体、大鼠皮层神经元外泌体、SCC-9和Cal-27细胞外泌体、MDA-MB-231外泌体、星型胶质细胞外泌体、中性白细胞外泌体等。

4， 外泌体Western blot定性检测中有没有内参？

     大部分文献中没有检测内参基因（19/22），个别文章中使用了Actin、GAPDH和Tubulin作为内参进行检测（见下图），从检测的结果来看，外泌体中的Actin、GAPDH和Tubulin的表达丰度相对于正常细胞样品中的较低，Western blot检测时可能会检测不到任何条带或者条带微弱。