产品简介：

本产品利用酶法对 DNA 进行片段化。

产品特点：

1.即开即用，用户不用单独购买各种成分并进行优化。

2.操作简便省时，只需要在样本中加入片段化酶，再反应一段时间即可。

3.跟后续的高通测序（NGS）兼容。

4.安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

5.性价比高。

6.本产品足够 20 次 DNA 片段化反应。

7.DNA 片段化试剂盒（酶法）只能用于科研。

产品参数：

成份规格包装

片段化酶 120μL0.5mL 红盖管

片段化酶 1 稀释液1040μL1.5mL 绿盖管

DNA 片段化溶液 A20μL0.5mL 白盖管

DNA 片段化溶液 B50μL0.5mL 白盖管

DNA 片段化反应终止液400μL0.5mL 本色管

150 mM MgCl2 溶液40μL0.5mL 本色管

片段化酶 2 稀释液200μL0.5mL 绿盖管

片段化酶 220μL0.5mL 红盖管

DNA 级 EDTA 溶液50μL0.5mL 本色管

超纯水1mL×101mL 蓝盖管

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

电泳上样缓冲液，推荐使用 Orange G 作为电泳示踪剂，因为溴酚蓝（BPB）和

二甲苯青（Xylene Cyanol）与 DNA 片段重叠，应避开使用。

使用方法：

一、基因组 DNA 片段化反应

1.确定反应体积。

2.基因组 DNA 在 100ng 以下使用 10μL 反应体系；基因组 DNA 在 100ng～ 1μg 之间使用 20μL 反应体系。注意：基因组 DNA 超过 1μg 时，以 1μg/20 μL 的反应体系增加反应管数或扩大反应体系，很好地为 5μg/100μL。

3.将 2 台 Thermal Cycler PCR 仪的温度分别设定为 16℃和 70℃。只有 1 台

仪器时设定为 16℃。

4.在冰上将基因组 DNA 以外的下列试剂添加到 0.2mL 反应管中，配制混合液，充分混匀后再加入基因组 DNA。用移液枪轻轻吸打或用手轻弹管壁，离心后使用，避免产生气泡，不能使用振荡器混匀。

注意：以上为基因组 DNA 1μg/20μL 反应体系；如果基因组 DNA 量少，那么要调整为适合的体系。

5.片段化酶 1 的稀释（使用前新鲜调制）。稀释方法如下：在冰上按下列顺序在1.5mL 反应管中加入 450μL 超纯水和 50μL 片段化酶 1 稀释液，充分混匀。轻轻振荡离心。将 1μL 的片段化酶 1 加入到配好的混合液中，然后将 200μL的移液枪调到 100μL 刻度后，轻轻吸打 10 次左右，避免产生气泡。再上下颠倒混匀（5 次以下），离心。不能使用振荡器混匀。注意：稀释后的片段化酶 1 请在 10 分钟内使用，不能保存。

6.确认 Thermal Cycler PCR 仪的温度在 16℃后，将 1μL 稀释后的片段化酶 1添加到上述加入基因组 DNA 的混合液中。吸打数次后，立即在 16℃条件下进行反应。推荐反应时间 5-8 分钟。注意：在冰上进行试剂添加和混匀的操作。

7.不要移动反应管，在 Thermal Cycler PCR 仪上直接加入 20μL 的 DNA 片段化反应终止液终止反应。用移液枪吸打 2-3 次后，再转移到冰上吸打数次。

8.确认 Thermal Cycler PCR 仪温度为 70℃后，将吹打后溶液的 0.2mL 反应管转移到 PCR 仪上。

9.70℃反应 5 分钟后，转移到冰上。注意：在冰上放置 2 分钟以上。

10.只进行 DNA 片段化反应时，在冰上放置后的 0.2mL 反应管中加入 1μL 的 0.5M EDTA 溶液，用移液枪吸打，充分混匀后，进行 DNA 片段的精制。

二、末端平滑化反应

11.将两台扩增仪分别设定为 16℃和 70℃。如果只有一台，则设定为 16℃。

12.片段化酶 2 的稀释（使用前调制）。稀释方法：在冰上准备 0.2mL 反应管，试剂按下述的比例（片段化酶 2 稀释液:片段化酶 2=9:1）配成混合液后，轻轻吸打，充分混匀，避免产生气泡。

13.在在冰上放置后的 0.2mL 反应管中加入 2μL 的 150mM MgCl2 溶液，移液枪吸打，充分混匀，避免产生气泡。不能使用振荡器混匀。

14.将 2μL 稀释后的片段化酶 2 添加到 0.2mL 反应管中，吸打数次混匀后，立即在 16℃反应 10 分钟。注意：此步操作在冰上进行。

15.反应结束后，把 0.2mL 反应管转移到冰上。只有一台扩增仪时，把温度调至 70℃。

16.加入 1μL 的 0.5M EDTA 溶液，充分吸打混匀后离心。

17.确认 Thermal Cycler PCR 仪设定的温度为 70℃后，将 0.2mL 反应管转移到 Thermal Cycler PCR 仪上反应 5 分钟。

18.将 0.2mL 反应管转移到冰上。

19.片段化 DNA 的确认：取相当于 200～250ng 量基因组 DNA（在冰上放置后） 的反应液约 10μL 进行 1.5%琼脂糖凝胶电泳。

选择我们的DNA 片段化试剂盒（酶法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！