产品简介:
细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒,简称 CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂盒,是一种基于 WST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物,在电子耦合试剂 1-Methoxy PMS 存在的情况下,可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜 色的深浅和细胞数目呈线性关系。
产品参数:
成分规格包装
细胞增殖及细胞毒性检测溶液
100 次1 mL 本色管
使用手册1 份无
运输及保存
低温运输,-20℃保存,有效期 12 个月,避免反复冻融。
自备试剂
96 孔板,酶标仪,420-480 nm 的滤光片
使用方法:
一、胞增殖及细胞毒性实验
1.在 96 孔板中接种细胞悬液(100 L/孔),通常细胞增殖实验每孔约 2000 个细胞,细胞毒性实验每孔约 5000 个细胞。具体每孔所用的细胞的数目, 需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定。
2.按照实验需要,进行培养并给予 0-10 L 特定的药物刺激,处理一段适当的时间(例如:6,12,24 或 48 小时)。
3.每孔加入 10 L 细胞增殖及细胞毒性检测溶液。如果起始的培养体积为 200
L,则需加入 20 L 细胞增殖及细胞毒性检测溶液,以此类推。可以用加相应量细胞培养基和细胞增殖及细胞毒性检测溶液但不加细胞的孔作为空 白对照,若担心所使用的药物会干扰检测,可以设置加相应量细胞培养液、药物和细胞增殖及细胞毒性检测溶液不加细胞的孔作为空白对照。
4.在细胞培养箱内继续孵育 1-4 小时,具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在 0.5,1,2 和 4 小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。注意:使用酶标仪前需确保每个孔内 没有气泡,否则会干扰测定。
5.用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光值,若无 450 nm 滤光片,可以使用420-480 nm 的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液,可以使用大于600 nm 的波长,例如 650 nm,作为参考波长进行双波长测定。
6.如果需要暂时不测定 OD 值,可以向每孔中加入 10 L 0.1M HCl 溶液或者 1% w/v 的 SDS 溶液,避光保存在室温,24 小时内吸光度不会发生变化。
二、实验结果分析
7. 细胞活力 = [OD(加药) - OD(空白)] / [OD(0 加药) - OD(空白)] × 100%。
8. 抑制率 = [OD(0 加药) - OD(加药)] / [OD(0 加药) - OD(空白)] × 100%。
9.OD(加药):具有细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液的孔的吸光值。
10.OD(空白):具有培养基、细胞增殖及细胞毒性检测溶液,没有细胞的孔的吸光值。
11.OD(0 加药):具有细胞、培养基、细胞增殖及细胞毒性检测溶液,没有药物
溶液的孔的吸光值。
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