产品简介：

端粒（Telomere）是由多个重复核苷酸元件(TTAGGG)所串联组成的一段真核细胞染色体末端的 DNA 序列，除了提供非转录 DNA 的缓冲物外，还能保护染色体末端免于融合和退化，保护染色体结构稳定和遗传完整。端粒是一个人老化速度的最重要和准确的指标，它的初始长度由遗传和环境因素决定，并且会随着时间的推移而减少。有研究表明，端粒长度与 DNA 修复、衰老、细胞凋亡及肿瘤发生等有密切的联系，因此，对于研究人员来说，准确而可重复地测量端粒长度尤为重要。本产品主要采用相对定量 qPCR 来直接比较样本的平均端粒长度，即采用端粒重复序列（Tel）的拷贝数与基因组单拷贝基因（SCR）的拷贝数比值(T/S)作为端粒相对长度。单拷贝基因引物(SCR)特异性识别并扩增人类 11 号染色体上 78bp 长的区域。

产品特点：

1.即开即用，用户只需要提供外周血 DNA 模板。

2.操作只需要半天，比 Southern 杂交检测法快 3-5 天时间。

3.无非特异性扩增。每组引物均已经过扩增曲线效率验证（ E>98%， R2>0.99），熔解曲线分析以及凝胶电泳验证。

4.使用 PCR 扩增，几乎每个分子生物学实验都有相关设备，非常方便。

5.本产品足够 100 次/50 样的染料法荧光定量 PCR 反应。

6.人端粒长度检测试剂盒（染料法qPCR 法）只能用于科研。

产品参数：

成分规格包装

2×染料法qPCR MasterMix1mL1.5mL 离心管

50× Rox 染料250uL1.5mL 棕色管

超纯水1mL1.5mL 离心管

端粒基因引物 (10uM)50uL1.5mL 离心管

单拷贝基因引物 (10uM)50uL1.5mL 离心管

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂

基因组 DNA：在 20μL 体系里可使用 0.5ng 至 5ng 量的基因组 DNA。

使用方法：

一、反应体系

建立如下所述的反应体系。若要进行多个反应，可制备通用组分的预混液，在每  管或每 孔中加入合适的体积，然后加入特殊的反应组分（例如 ：模板）。

1.推荐使用 20μL 体系以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

2.盖上或密封反应管/PCR 板 ，轻轻混匀。可以稍微离心 ，确保所有组分都在管底。

3.将反应体系置于荧光定量 PCR 仪中 ，收集数据并分析结果。按下表所示设置您的 PCR 仪。最适温度 和孵育时间可视具体情形而定。

*ROX 染 料

可根据选择的仪器在反应体系中加入 ROX 染料 ， 将反应体系中的荧光信号标准化。下表所列为使用 不同仪器操作时所需的 ROX 量（每 50µL 反应体系）：

三步法扩增程序：

阶段循环数温度时间

预变性1x95℃1min

变性

35-40x95℃10 sec

退火55℃30 sec

延伸72℃45 sec

熔解曲线 (Melt Curve)

注：决定最佳退火温度的主要因素为引物长度及引物碱基组成。根据试剂盒  端粒及 SCR 引物组的特性 ，我们建议退火温度设置为 55℃。

结果分析

定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。

使用的 2^-ΔΔCt 法 (Livak 法)进行的计算 得到 T/S 的比值作为端粒的相对长度

选择我们的人端粒长度检测试剂盒（染料法qPCR 法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！