产品简介：

本试剂盒是基于 Inoue 方法的、高效快速 E.coli 化学感受态细胞制备试剂盒。

产品特点：

1.一步式操作，离心后重悬细胞即可，非常简单。

2.转化率高，转化效率一般都在 10E8/ug 质粒以上。

3.重复性好，可用于各种 E.coli 菌种，包括 K12 系（如 JM109、DH5a 等）和

B 系（如 BL21 系列菌种）。

4.适用于低、中、高拷贝的各种质粒。

5.本试剂盒足够 20 次制备，每次可以制备可以用 50 mL 菌液制备 80 管感受态细胞。所得感受态细胞在-80℃至少可以保存半年以上。

6.高效E.coli感受态细胞制备试剂盒只能用于科研。

产品参数：

名称规格包装

E.coli 化学感受态细胞制备

溶液A250 mL×2250mL 本色瓶

E.coli 化学感受态细胞制备

溶液 B6 mL10mL 本色瓶

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输，4℃保存（开封后请-20℃保存，防止污染），有效期一年。

自备试剂

无菌超纯水，SOB 和 SOC 液体培养基，相关抗菌素，温控摇床。

使用方法：

1.划盘，过夜培养出单菌落。

2.次日下午，接种一个单个直径为 2-3 毫米的菌落到 1 mL 不含抗生素的 SOB

液体培养基中，37℃ 220rpm 摇晃过夜培养。

3.次日早上，将 20 uL 上步得到的菌液接种到 2 mL SOB 液体培养基中，37℃

250-300 rpm 摇晃培养 3 小时。此时菌液将轻微浑浊。

4. 将 1 mL 上步得到的菌液接种到 50 mL SOB 液体培养基中（用 250 mL 三角瓶），用户也可以分别接种 1 mL，0.5 mL 和 0.25 mL 到 3 个 50 mL 的 SOB液体培养基中，这样 2-3 小时测 OD 时总有一瓶 OD 会在 0.3-0.4，避免了多次测 OD 可能带来的污染。

5.  室温或 18℃ 250-300 rpm 摇晃培养 2-3 小时，直到 OD600 在 0.3-0.4 之间。注意：确保室温或 18℃培养非常重要，在此温度下细菌 OD600 达到0.3-0.4 所需时间跟菌种不同而不同。

6. 将菌液放置在冰上 10 分钟。同时预冷下步要用的 50 mL 无菌离心管和 20 mL溶液A。所需冷冻离心机也最好开启制冷。

7.将 50 mL 菌液转移到 2 个预冷的无菌离心管中，每管 25mL。在冷冻离心机上 4ºC 3000g 离心 10 分钟，弃上清。注意：必须低温离心，否则转化效率将减低 100 倍。

8.再在 4ºC 3000g 短暂离心半分钟，用移液枪小心吸出残留液体。注意：残留上清必须彻-底去除，否则会影响感受态效率。

9.在沉淀中加入 20 mL 预冷的溶液 A，轻弹离心管底轻柔重悬菌体。注意：不要涡旋振荡。

10.冰上放置 5 分钟。期间预冷 4.3 mL 新鲜配制的感受态活化液（4 mL 溶液A+0.3 mL 溶液 B，充分混匀后放冰上）和装感受态细胞所需的无菌塑料离心管。

11.4ºC 3000g 离心 10 分钟，弃上清。

12.在沉淀中加入 4 mL 第 9 步预冷的感受态活化液，重悬细菌后冰上放置 10 分钟。

13.按 50 uL/管分装到预冷的无菌塑料离心管中。此时细胞将处于感受态，可以直接用于转化，也可立即放到-80℃保存。50 mL 菌液一次可以制备 80 管感受态细胞。

二：转化步骤

1.将冻存的感受态细胞置于冰中解冻。

2.加入 1-5 uL 质粒（100pg-10ng）或 1-5 uL 连接反应液。用加 DNA 的移液器轻柔吹打混匀，不要涡旋震荡。

3.冰浴 15-30 分钟。期间可以 37ºC 预热 1 mL 自备的、不含抗菌素液体培养基

（此处最好用 SOB，因为 LB 培养基将降低转化率）。

4.42ºC 热激 60 秒后冰浴 1-2 分钟。

5.加入 1 mL 37ºC 预热的不含抗菌素液体培养基后，37ºC 保温 1 小时。如能

160~225rpm 振荡培养更佳。

6.将 50-100 uL 菌液涂布在含适当抗菌素的琼脂平板培养基上，37ºC 过夜培养。

选择我们的高效E.coli感受态细胞制备试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！