产品简介：

石蜡包埋切片 DNA 样本、血液游离 DNA 样本、法医 DNA 样本和考古 DNA 样本都是非常重要的实验材料，但是这些材料的 DNA 不但含量稀少，而且往往都高度降解，使用前都需要先进行扩增。目前进行扩增的方法很多，包括 PEP-PCR、DOP-PCR、MDA、SCOMP，balanced-PCR 等，但各有缺点，不尽人意。为此，本公司结合 DNA 环化技术和 RCA 滚环扩增技术，对痕量 DNA 进行扩增。其原理示意图如下：

产品特点：

1.即开即用，十分简单方便，用户不需要辛苦摸索条件。

2.直接使用纯化的线状 dsDNA 为模板。本产品不包括纯化试剂盒。如果 DNA 是古旧的有损伤的 DNA，需要使用另外的试剂盒（痕量古旧 DNA 修复及扩增试剂盒）。

3.最-低可以使用 5pg 的模板 DNA（一个人体细胞的 DNA 为 6pg），最后可以扩增上 1 千-1 万倍（起始模板DNA 越少，扩增倍数越高）。

4.优化的反应体系，所有反应一管式完成，避免了珍贵痕量样本的丢失。

5.使用高保真的phi29 DNA 聚合酶进行扩增，避免了在扩增过程中引入新突变。

6.扩增试剂含荧光染料，可以实时监测扩增反应过程，不需要跑电泳检测，节约宝贵的扩增后样品。

7.本产品足够 50 次 20uL 体系的环化-扩增反应。

8.得到的 DNA 可以直接用于二代测序、酶切或qPCR 等后续实验。

9.痕量 DNA 滚环扩增试剂盒只能用于科研。

产品参数：

成份规格包装

10×DNA 环化-扩增缓冲液100 uL0.5mL 白盖管

DNA 环化酶 A25 uL0.5mL 红盖管

DNA 环化酶B25 uL0.5mL 红盖管

RCA 专用随机引物溶解液10 uL0.5mL 绿盖管

RCA 专用随机引物干粉50 次0.5mL 本色管

phi29 DNA 聚合酶，10U/uL50 uL0.5mL 红盖管

超纯水1mL1mL1.5mL 蓝盖管

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃保存,有效期为一年。

自备试剂

样本 DNA 纯化试剂盒、DNA 片段回收试剂盒（从 RCA 反应体系中回收扩增产物）

使用方法：

一、DNA 环化

1.首-次使用本试剂盒时，需要在 RCA 专用随机引物溶解液化冻后，将 110uL 全部加入到 RCA 专用随机引物干粉管中，涡旋震荡半分钟溶解，短暂离心，得 RCA 专用随机引物。放冰上待用。没用完的需要放-20℃长期保存。

2.按下表在 200uL 的PCR 管中设置和进行 DNA 环化-扩增反应：

成分管 1（样本）管 2

（无模板对照）

自备模板 DNA（5pg-100ng）1-8.5 uL不加

10×DNA 环化-扩增缓冲液1 uL1 uL

超纯水加到 9.5 uL加到 9.5 uL

DNA 环化酶 A0.5 uL0.5 uL

合计10 uL10 uL

在 PCR 仪器上 37℃ 2 小时，65℃ 20 分钟灭活酶

超纯水4.0 uL4.0 uL

10×DNA 环化-扩增缓冲液0.5 uL0.5 uL

DNA 环化酶 B0.5 uL0.5 uL

合计15 uL15 uL

室温放置 2 小时，65℃ 10 分钟灭活酶

超纯水1.5 uL1.5 uL

10×DNA 环化-扩增缓冲液0.5 uL0.5 uL

RCA 专用随机引物溶液2 uL2 uL

合计19 uL19 uL

放在PCR 仪器上，设置 95℃加热 5 小时，自然冷却到室温。

再加入下列成分

phi29 DNA 聚合酶，10U/uL1 uL1 uL

混匀后放荧光定量PCR 仪器上，设置 30℃保温 16 小时，每 10 分钟

设置成一个循环，每个循环采集一次 SYBR 通道的荧光信号。

二、数据分析

3.由于是可以实时检测RCA 扩增反应，所以RCA 扩增反应不一定进行 16 小时， 可以在扩增荧光信号的曲线进入平台期（已经没有新的 DNA 合成）后结束。因为 phi29 DNA 聚合酶有很强的 3-5 外切酶活性，在扩增反应耗尽 dNTP 后，它可能会进入酶切模式，逐渐降解已经合成的 DNA。

4.65℃保温 10 分钟灭活酶。由于 phi29 DNA 聚合酶有很强的 3-5 外切酶活性， 因此必须灭活，否则它将逐渐降解反应管中已经合成的 DNA。

5.典型实验结果。有扩增的样本将有平缓的 S 荧光曲线，无模板对照将没有此扩增曲线（见下图）：

6.如果没有荧光定量 PCR 仪器，则只能电泳检测或PCR 检测是否有扩增。

7.扩增所得 DNA 可以用于后续实验，如 qPCR 扩增。如果后续实验需要纯化去除dNTP（如通过测 OD 确定浓度）或去除 RCA 专用随机引物，则需要自备试剂盒进行纯化处理。

选择我们的痕量 DNA 滚环扩增试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！