产品简介：

本产品是用于一管式双链 cDNA 合成的试剂盒。cDNA 第一链合成的原理是以 Oligo dT 为通用引物的、MMLV 催化的逆转录反应。

产品特点：

1.即开即用，含有合成两条 cDNA 链的所有试剂，用户只需要提供mRNA。

2.一管式进行，第一链 cDNA 合成后直接进入第二链的合成。

3.所得双链 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、 cDNA 文库构建、抑制性差减杂交等。

4.本试剂盒足够 10 次 80 uL 体系的双链 cDNA 合成反应。

5.一管式双链 cDNA 合成试剂盒只能用于科研。

产品参数：

成份规格包装材料

cDNA 第一链合成反应液

（含 Oligo-dT 和 dNTP）50 uL0.5 mL 绿盖管

MMLV 逆转录酶10 uL0.5 mL 红盖管

5×cDNA 第二链合成反应液160 uL0.5 mL 白盖管

20×cDNA 第二链

合成酶混合液40 uL0.5 mL 黄盖管

超纯水1 mL1.5 mL 蓝盖管

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

mRNA 提取试剂盒

使用方法：

一：mRNA 的制备

本试剂盒不提供mRNA 提取试剂，用户需自备相关试剂。二：双链 cDNA 的合成

1.在一个干净的塑料离心管中，按下表设置 cDNA 合成反应：

成分用量

自备样品mRNA4 uL（0.5-2ug）

cDNA 第一链合成缓冲液

（含 Oligo dT 引物和 dNTP）5 uL

70℃ 2 分钟后室温放置 2 分钟，短暂离心

加入 MMLV 逆转录酶1 uL

轻柔吹打混匀后 42℃保温 90 分钟合成第一链 cDNA

超纯水48 uL

5×cDNA 第二链合成缓冲液16 uL

20×cDNA 第二链合成酶混合液4 uL

共 80uL。吹打混匀后，短暂离心，16℃保温 2 小时

2.如果需要将双链 cDNA 平末端化，则需加自备 T4 DNA 聚合酶 2 uL，轻柔吹打混匀后，16℃继续保温 30 分钟。然后进入下一步。如果不需要将 cDNA 平末端化，则直接进入下一步。

3.终止反应：如果后续实验(如电泳)不担心 EDTA 的影响，可以直接加入 4 uL 0.2M EDTA 溶液终止反应，然后将样品放-20℃长期保存。如果后续实验

（如PCR 扩增）不担心cDNA 的单双链状态，可以 95℃保温 10 分钟终止反应。如果后续实验既受EDTA 影响，又不能是单链DNA，则可以用 PCR过柱纯化法纯化。

4.电泳 5uL 检测 cDNA 质量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范围内呈模糊一片，则 cDNA 合格。如果没看见 cDNA 或有其他异常，需查找原因后再继续。

5.所得 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、cDNA 文库构

建、抑制性差减杂交等实验。

选择我们的一管式双链 cDNA 合成试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！