产品简介：

本产品是基于荧光探针检测的即用型 RT-PCR 试剂盒，可以对靶 RNA 分子进行实时定量 RT-PCR 分析（quantitative RT-PCR、qRT-PCR）。产品含有经过优化的缓冲液组分、逆转录酶、热启动 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 稳定剂dNTPs、MgCl2 和稳定剂等所有实时定量 RT-PCR 所需要的成分，用户只需加入 RNA 模板、引物和探针即可进行探针法实时定量 RT-PCR 反应，具有广泛的用途。

产品特点：

1.以 2×Mix 提供，用户只需准备模板、引物、探针和 ROX 染料（取决于 qPCR仪器）即可以进行探针法实时定量 RT-PCR 实验，非常方便快捷，降低了操作误差。

2.各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。灵敏度  最高时可以达到 50 拷贝/反应（跟模板质量，引物设计等相关）。

3.既可用于TaqMan 探针qRT-PCR，也可以是分子信标（molecular beacon的 qRT-PCR。

4.灵敏度和专一性比染料法荧光定量 RT-PCR 更高。

5.可用于基因表达分析、SNP 分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检。

6.探针法qRT-PCR试剂盒只能用于科研，1 mL 足够 100 次 20 μL 体系的探针法 qRT-PCR反应。

产品参数：

产品规格

50次

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。

放置三周。

自备试剂

RNA 模板、引物、TaqMan 探针、超纯水。

使用方法：

一、如果有 N 个样品并且做定量分析，最好设置 N+7 个反应，多出的 7 个中， 6 个是做标准曲线的阳性对照，一个是阴性对照（NC）。在 N+7 个 PCR 管中加入下列成分。如果是做定性分析，则 6 个做标准曲线的样品缩减成一个阳性对

照（PC），用户自己需要根据下表进行适当修改（把 6 个标曲反应改成 1 个阳

性对照反应）。

成分N 个样品

管6 个标准曲线

管NC 管

探针法 qRT-PCR 缓冲液各 10 μL10 μL10 μL

自备引物 1（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自备引物 2（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

N 个自备模板 RNA各 1-2 μL不加不加

自备阳性对照模板（6 个梯度）不加各 1 μL（1 管

加 1 个梯度）不加

阴性对照模板（水）不加不加1 μL

自备探针（5 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自备 50×ROX I 染料或自备

50×ROXII 染料（见注）各 0.4 μL各 0.4 μL0.4 μL

探针法 qRT-PCR 酶混合液2 μL2 μL2 μL

补超纯水到20 μL20 μL20 μL

注，下列信息仅供参考，具体以 qPCR 仪器的使用手册为准。

1、不需要ROX 的机型：AgilentMX3000 和MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、SmartCycler System、Thermal Cycler Dice RealTime System 等型号的荧光 PCR 仪器不需要加 ROX 染料，但加入的话也不会影响整个 PCR 分析2、需要使用ROXI 的机型：ABIPrism7000、7300、7700、7900HT、Step One Step One Plus。

3、需要使用 ROXII 的机型：ABIPrism7500、7500Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、CorbettRotorGene3000。

二、放入荧光 PCR 仪中进行扩增, 下表的扩增参数仅供参考，一定需要根据靶分子长度，引物和探针的 Tm 值、标记染料的种类等进行调节。一般选择三步法PCR：盖上盖子后上机，按下面参数进行 RT-PCR：

三、数据处理

1. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性。一般情况下，阴性对照 Ct 大于或等于 40（阈值需要以阴性

对照的Ct 值确定，此处为便于叙述以40 为例，具体情况很可能阈值不一样）

阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于

40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。

选择我们的探针法qRT-PCR试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！