产品简介：

对 dsDNA 进行准确定量是很多重要的分子生物学实验的前提。不同的定量方法有不同的线性范围和检测灵敏度，对干扰的屏蔽能力也各不相同。其中， OD260 测定法操作最-简单，但灵敏度只有 5 μg/mL，不能屏蔽单链 DNA、RNA 和核苷酸的干扰。为此本公司开发了基于 Hoechst 33258 荧光染料的 dsDNA 定量产品。

产品特点：

1.即开即用，用户不需要单独摸索最佳条件。

2.操作简单，只需要将 Hoechst 33258 工作液与待测样品混合即可。

3.彻-底屏蔽 RNA 的干扰，同样浓度 RNA 产生的荧光不超过 DNA 的 1%，尤其适用于直接用细胞裂解液测定 DNA 浓度（此时有大量RNA 存在）。

4.能部分屏蔽单链 DNA 的干扰。Hoechst 33258 荧光染料与单链 DNA 结合时发出的荧光并不会与单链DNA 浓度成比例。

5.需要激发波长为 365 nm，发射波长为 458 nm 的荧光仪。

6.可选用比色皿检测模式，也可选用多孔板检测模式。

7.灵敏度比 OD260 测定法高 500 倍，为 10 ng/mL。

8.线性范围为 10 ng/mL-10 μg/mL（相当于 10 pg/μL-10 ng/μL）。

9.Hoechst 33258 染料对dsDNA 具有高度选择性，主要识别AT 区。

10.提供dsDNA 定量对照，用于制备标准曲线。dsDNA 定量对照AT 含量为 59%。

11.本产品足够 100 次 100 μL 体系的测定，每次用 10 μL 样品。

12.DNA 浓度测定试剂盒（Hoechst 33258 法）只能用于科研。

产品参数：

规格及成分

保存和运输

低温运输，-20℃保存，有效期半年。

自备试剂

超纯水，能检测激发波长为 365 nm，发射波长为 458 nm 的荧光仪。

使用方法：

1.将 DNA 标准品用 Hoechst 33258-DNA 结合液稀释成 1 mg/mL，此为工作液，放冰上待用。

2.打开仪器预热 10-15 分钟。

3.用超纯水将 20×Hoechst 33258-DNA 结合液稀释到 1×，用多少稀释多少。

4.用 1×Hoechst 33258-DNA 结合液将本试剂盒提供的dsDNA 定量对照梯度稀释成 1 mg/mL、100 μg/mL、10 μg/mL、1 μg/mL、100 ng/mL、10 ng/mL共六个浓度，各取 100 μL 到离心管中放常温待用。

5.取 1×Hoechst 33258-DNA 结合液 100 μL 到离心管中作为空白对照。

6.对 N 个待测样本，如果是待测 DNA 溶液，则取 10-100 μL 到离心管中，补 1×Hoechst 33258-DNA 结合液到总体积为 100 μL；如果是细胞裂解液，则稀释细胞裂解液使其 SDS 的浓度不超过 0.02%。如果超过此浓度，将在下步会降低荧光读数。

7.在上述 6+1+N 个离心管中各加 100 μL Hoechst 33258 染液，充分震荡混合。

8.40℃放置 20 分钟。

9.测定 458 nm 光吸收（激发波长为 365 nm）。

10.所有光吸收数值减去空白对照数值，然后根据此数值制作标准曲线，再用 N 各样本的数值从标准曲线中推出检测管中样本的 DNA 浓度，再根据稀释倍数计算出稀释前样本中 DNA 的浓度。

选择我们的DNA 浓度测定试剂盒（Hoechst 33258 法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！