土壤酸性蛋白酶试剂盒 返回列表页

土壤酸性蛋白酶（Solid -Acid Protease，S-ACPT）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

土壤酸性蛋白酶试剂盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT 在酸性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

测定原理：

酸性条件下，S-ACPT 可将酪蛋白水解产生酪an酸；在碱性条件下，酪an酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在 680nm 有特征吸收峰。

试剂组成和配置：

试剂一的配制：临用前按液体一：液体二：蒸馏水=140（μl）：20（μl）：21（ml）的比例配制，现配现用，如出现白色絮状沉淀则不能用。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 6ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存；

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 2ml 试剂七，沸水浴加热溶解，然后加入 8ml 试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂 4℃保存；

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 40ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存；试剂六：液体 1.5ml×1 支，0.05mg/ml 标准酪an酸溶液，4℃保存；

自备仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml 玻璃比色皿、蒸馏水

样品处理：

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

测定步骤：

1、试剂一的配制：见试剂的组成和配制。

2、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 680nm，蒸馏水调零。

3、样本测定：

混匀后，40℃水浴 30min，振荡 5-6 次，使土样与反应液充分接触：混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液，在EP 管中加入下列试剂

混匀，40℃水浴 20min，8000g 25℃离心 10min，取上清液，680nm 下读取各管吸光值A。

注意事项

标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-ACPT 活性计算：

单位定义：每天每g 土样中产生 1mg 酪an酸为一个 S-ACPT 活力单位。

S-ACPT(mg/d/g 土样)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=24×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管

C 标准管：标准管浓度，0.05mg/ml；V 反总：反应体系总体积，0.4ml；T：反应时间，30min=1/48d；

W：样本质量，0.04g。

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