High-Affinity Iodoacetyl Agarose 简介

抗标志亲和凝胶是一种纯化的小鼠IgG2b单克隆抗体，共价连接到琼脂糖琼脂糖4B上。该产品具有高蛋白结合能力（>1.1 mg 蛋白/mL）和稳定性，是大肠杆菌、酵母、昆虫和哺乳动物表达系统中表达的Flag标记蛋白的高效纯化或免疫沉淀（IP）的理想选择。

High-Affinity Iodoacetyl Agarose 使用方法

1. Buffer 的准备：

建议用高纯水配置 Buffer，且配置后通过 0.45 μm 滤膜过滤除菌。

2. 偶联含巯基样品：

(1) 样品处理：用偶联缓冲液溶解含巯基的蛋白、多肽或其他生物配体，使其终浓度大约为 1 mg/mL。 

(2) 装柱：用偶联缓冲液冲洗柱底筛板，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出 1-2 cm 的偶联缓冲液。将 High-Affinity Iodoacetyl Agarose 悬浮混匀并取适量加入柱管中，让其缓慢沉降到管底。

(3) 平衡：使用 3 倍柱体积的偶联缓冲液平衡层析柱，让缓冲液缓慢流出，流速大约为 1 mL/min。重复上述操作 2 次以上。 

(4) 偶联：盖住底盖，加入样品，让溶液进入柱床。盖住顶盖并将层析柱放置在摇床上，室温孵育 30 分钟。偶联好后，固定层析柱于铁架台，取下底盖，让溶液流出，填料沉降到底部。 

注：1 mL 琼脂糖凝胶加入大约 1 mL 样品。 

(5) 洗杂：用 3 倍柱体积的偶联缓冲液冲洗柱子，流速大约为 1 mL/min。收集流出液，测其 OD280 值，并与偶联前相比较，判断偶联效率。 

(6) 封闭：盖住底盖，加入与柱体积相同的封闭缓冲液。盖住顶盖并将层析柱放置在摇床上，室温孵育 30 分钟。封闭好后，固定层析柱于铁架台，取下底盖，让溶液流出，填料沉降到底部。 

(7) 储存：如果立即使用，直接进入抗体纯化步骤。如果不立即使用，使用 3 倍柱体积的结合/洗涤缓冲液洗涤，再加入 1 倍柱体积的存储缓冲液 2-8°C 保存，严禁冻结。 

3. 过柱纯化抗体：

(1) 平衡：使用至少 5 倍柱体积的结合/洗涤缓冲液平衡层析柱，让缓冲液缓慢流出，填料沉降到底部。 

(2) 抗体结合：加入抗体样品，让抗体样品缓慢流出，流速大约为 0.5 mL/min，收集流出液。如有必要，可以重复或循环上样以提高得率。

(3) 洗杂：用 30-50 倍柱体积的结合/洗涤缓冲液冲洗柱子，直到 OD280 紫外吸收达到一个稳定的基线，流速大约为 1.5 mL/min，收集流出液。 

(4) 洗脱：洗杂完毕后，用 5-10 倍柱体积的洗脱缓冲液洗脱柱子（可通过测量 OD280 监测蛋白洗脱情况。），流速大约为 1 mL/min，收集洗脱液，并立刻加入中和缓冲液（约 1/10 洗脱液体积）调节 pH。 

(5) SDS-PAGE 检测：将纯化得到的抗体样品（包括流出组分、洗杂部分和洗脱部分）以及原始样品使用 SDS-PAGE 检测纯化效果。 

注意事项及储存

1.储存在2-8ºC，并稳定至少2年。

2.不要干燥或冷冻。