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| 供货周期 | 一个月 |
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产品简介
详细介绍
产品详情：
对膜蛋白提取有高特异性和高产量
每个批次的PureCube凝胶均是按照严格的质量标准体系生产并严格检验，以确保每一批分装的产品都有高的蛋白结合能力。通过与特异性抗原表位相互作用，辅以优化过的纯化操作步骤，能使目标蛋白在洗脱组分中有高产出量。图1是对CXC趋化因子受体4(CXCR4)的纯化溶于Fos-Choline®-14的带标签蛋白通过大肠杆菌表达，再经由含PureCube Rho1D4琼脂糖的层析柱纯化。用Rho1D4多肽作为洗脱液，4次洗脱组分每毫升共收集到0.8mg、1.0mg、0.85mg和0.6mg目标蛋白。蛋白印迹结果说明CXCR4大约是65 kDa和35 kDa。这些条带是39.7 kDa膜蛋白的二聚体和单体。单体、二聚体的分离以及去除洗脱肽段，可以通过排阻层析的方法实现。
图1：用PureCube Rho1D4琼脂糖纯化CXCR4。
大肠杆菌裂解液（TL）溶解在Fos-Choline®-14中，溶解的组分（SF）与装有Rho1D4抗体的免疫亲和层析柱相结合。平衡组分中没有测得损失目标蛋白，经分光光度计测定，CXCR4在洗脱组分（E1-E4）中得浓度范围在0.6-1.0mg/mL。
蛋白 | 表达系统 | 纯度 | 产率（所有回收蛋白） | 采取的纯化步骤 |
hVN1R1 G蛋白偶联受体 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | 90% | 1mg/1g细胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
FPR3 G蛋白偶联受体 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | 90% | 2mg/6g细胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
TAAR5 G蛋白偶联受体 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | 90% | 1mg/9g细胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
OR131-2 G蛋白偶联受体 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | 90% | 2.9mg/10g细胞 | Rho1D4 IAC +centrifugation |
hOR17-4 G蛋白偶联受体 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | 90% | 7.5mg/2.5L培养物 | Rho1D4 IAC+SEC |
hOR17-4 G蛋白偶联受体 | 无细胞小麦胚芽提取物 | 70%* | 0.3mg/mL 反应溶液* | Rho1D4 IAC+SEC |
CD81 四次跨膜蛋白 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | ＞95% | 26μg/3×10^7 个细胞 | Rho1D4 IAC |
AE1 溶质载体 | S.啤酒系BJ5457 | 93% | 2.5mg/18L 培养物 | Rho1D4 IAC |
表1：有文献报道的使用Rho1D4系统纯化膜蛋白的纯度和产率。尽管很多用Rho1D4系统纯化的膜蛋白均为G蛋白偶联受体家族，该系统也可以有助于辨别其他如转运体之类的膜蛋白。 IAC：免疫亲和层析；SEC：排阻层析。
在20世纪80年代发现Rho1D4表位和配对抗体，当时通过将抗体偶联到Sepharose®上来纯化在猴肾细胞中表达的牛视紫红质。自此，Rho1D4系统（标签，偶联抗体的亲和基质，洗脱肽）开始用于少量膜蛋白的纯化，包括G蛋白偶联受体（GPCR），ATP结合转运体，溶质反向转运体和一个四次跨膜蛋白。
图2：假设有3个跨膜域的膜蛋白。Rho1D4标签加到膜蛋白C端，它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A
通过转基因修饰在目标膜蛋白的C端（或N端）加上Rho1D4标签（如图1）。一旦配有该序列，即可用装载有Rho1D4抗体的亲和基质捕获目标蛋白，并随后通过添加过量Rho1D4多肽，产生竞争性结合基质表面抗体来洗脱目标蛋白，用此方法洗脱比改变pH值等方式更加温和。
Rho1D4系统的一大优势是抗体与表位相互作用特异性非常高。而其另一大优势是洗脱目的蛋白收率相当高。利用Rho1D4纯化的目标蛋白可用于功能性研究，如：配体结合的特性，蛋白与蛋白间的相互作用。
*纯度是从低浓度经一步Rho1D4 IAC在反应溶液中得出的；产率是在洗脱成分浓缩并过SEC柱后计算。
产品优势：
（1）德国制造，欧美膜蛋白纯化产品供应商；
（2）膜蛋白纯化的理想解决方案，可以获得纯净且活性的膜蛋白；
（3）结合能力可高达3-4mg/mL；
（4）高度特异性纯化带有标签的重组膜蛋白；
（5）可重复再生使用；
（6）好的流量分布和小空隙体积；
（7）兼容常用的色谱仪器；
（8）配合Nanodisc使用，是目前非常有效的膜蛋白提取解决方案，数家科研院校正在使用
产品参数：
用途 | Rho1D4 (TETSQVAPA)标记蛋白的高特异性亲和纯化 |
特异性 | 与Rho1D4标记蛋白的亲和性 |
特殊功能 | 强烈推荐用于膜蛋白的纯化 |
结合力 | 3-4 mg / ml 琼脂糖 |
磁珠配体 | Rho1D4 抗体 |
粒径大小 | 40 μm |
螯合剂稳定性 | 在含有10 mM DTT 和1 mM EDTA的缓冲液中稳定 |
罐装量 | 以50 %悬浮液进行运送 |
所需设备 |
· 裂解液 · 洗涤缓冲液 · 洗脱缓冲液 · 冰水浴 · 可用50 mL离心管的可预冷离心机 (最小转速 10,000 x g) · 50 mL 离心管 · 微量移液枪和微量移液枪尖 · 一次性重力柱，带盖底出口，2ml · pH计 · 回转摇床 · SDS-PAGE缓冲液，试剂和设备 可选择：Western Blot试剂和设备 |
推荐流速和保存温度 | 0.25-1.0mL/min，4℃ |
订购详情：
货号 | 产品 | 粒径 （μm） | 结合 载量 | 运输 温度 | 储存 温度 | 应用 |
33101 | PureCube Rho1D4 Agarose(1ml) | 40 | 3-4mg/mL | 冰袋 | 4° C | 超高特异性用于纯化带Rho1D4 标签的膜蛋白，最大流速为 6 mL/min，稳定于低浓度去污剂环境
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33102 | PureCube Rho1D4 Agarose(5ml) | 40 | 3-4mg/mL | 冰袋 | 4° C | |
33103 | PureCube Rho1D4 Agarose(10ml) | 40 | 3-4mg/mL | 冰袋 | 4° C | |
33105 | PureCube Rho1D4 Agarose(50ml) | 40 | 3-4mg/mL | 冰袋 | 4° C | |
33199 | Rho Starter Set 1:PureCube Rho1D4 | 3-4mg/mL | 冰袋 |