神经性贝类毒素HPR酶标抗原 返回列表页

神经性贝类毒素(neurotoxic shellfish poisoning，NSP)主要是指从一种赤潮生物短裸甲藻(Ptychodiscusbreve)中分离出的一类毒素——短裸甲藻毒素(brevetoxins，PbTx)的理化特性和药理特性与西加毒素(CTX)相似。PbTx可引起鱼类、软体动物、甲壳动物、海绵动物、棘皮动物及底栖藻类的大量死亡。有毒的短裸甲藻被贝类摄食后，其毒素在体内积累，并通过食物链传递给人类，引起食物中毒。中毒的主要症状为瞳孑L放大，身体冷热无常，恶心、呕吐、腹泻，运动失常，但没有麻痹感。因此，为了与引起麻痹作用的DSP相区别，称为神经性贝类毒素。NSP中毒症状持续时间较短，一般从10min～20h。

免疫分析法是基于抗体与抗原或半抗原之间的高选择性反应而建立起来的一种生物化学分析法，即根据抗原-抗体反应，采用特异性抗体来检测药物、激素、蛋白质、微生物等物质的定量分析方法。免疫分析法主要包括酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、放射性免疫法、荧光免疫法等，具有方便、快速的特点，但也存在一定的缺点，如费用较高、毒素之间的交叉反应难避免、实验结果重现性较差等。

ELISA是检测海洋生物毒素所采用的主要免疫方法。该技术可用目测，也可用酶标仪测定光密度值，具有易定性定量的优点^[6]。Tsao等^[7]采用单克隆抗体ELISA检测法检测ASP中的软骨藻酸(domoic acid, DA)，并建立了基于单克隆抗体的胶体金免疫条检测法；该方法的检测限为5 ng/mL，在10 min内就可完成测定，提示免疫条检测可用来快速检测贝类样品中的DA。也有研究者建立了基于基因工程单链抗体竞争ELISA检测方法，该方法最大的优势是毒素可在大肠杆菌中快速、大量得到表达，且容易和其他小分子融合，形成融合蛋白以用于检测或其他用途；对该方法进行验证发现，其与标准高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography, HPLC)检测结果有较好的相关性^[8]。李军涛等^[9]建立DSP免疫荧光层析试纸条检测方法，灵敏度可达0.125 μg/mL，达到我国贝类产品中DSP所允许的*。Dubois等^[10]建立了间接竞争ELISA方法检测STX，该方法用毒素的偶联物免疫产生的抗体来检测贻贝、牡蛎和扇贝中的STX类毒素；在检测之前，用90%的乙醇溶液将STX类毒素从贝类组织里快速提取出来，该方法的*检测限为5 μg/kg。Garthwaite等^[11]也建立了4类贝毒的ELISA方法，均可满足贝类提取物中样品的鉴定，且样品回收率较高。TTX为氨基全氢喹唑啉型化合物，是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一^[12]。Thattiyaphong等^[13]建立了一种侧流免疫层析技术来实现TTX的快速检测，并运用该方法检测了河鲀及食用鱼中TTX的含量；与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)相比，该方法的灵敏度为94.0%，特异性为92.4%。总的来说，侧流免疫层析技术可用于大批量样本的筛选，阳性结果的样本再使用LC-MS/MS进行确认，减少了LC-MS/MS的测试量，降低了检测成本。Reverte等^[14]开发了一种基于双硫醇自组装单分子膜的新ELISA方法，该方法可用于检测河鲀中TTX的含量，检测限为0.23 mg/kg，其与LC-MS/MS法的相关性为0.991。

大田软海绵酸(okadaic acid, OA)是DSP中的主要成分，属于聚醚类海洋生物毒素，尚无致死病例，但长期摄入可以致畸及致癌^[15]。刘仁沿等^[16]通过细胞融合，制备抗OA单克隆抗体和胶体金标记抗体，建立快速检测OA的免疫层析试纸条分析方法，该方法检出限为500 ng/mL。该研究组在此基础上进行改进，使用卵清蛋白合成高耦联比的包被抗原，以硝酸纤维素膜为载体，改进后方法检测限达12 ng/mL^[17]。张洋等^[18]采用自行研发的免疫胶体金试纸条对双贝壳类DSP的主要成分OA的污染情况进行调查，通过与ELISA检测法的结果进行比较，发现该方法检测结果准确可靠，未出现假阳性结果。Johnson等^[19]对4种已经商业化的快速检测试剂盒是否可检测英国双壳贝类中的DSP进行验证。这4种试剂盒包括1种ELISA试剂盒、1种蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)试剂盒以及2种侧流免疫测定(lateral flow immunoassay, LFI)试剂盒。实验结果表明，ELISA与LC-MS/MS具有较好的相关性，且不存在结果偏大的情况，但是存在假阴性结果；2种LFI试剂盒与LC-MS/MS检测结果大部分具有一致性，但存在假阴性结果。总的来说，选择何种方法去检测DSP主要取决于检测要求、实验室的条件、实验人员是否经过训练以及对结果的要求是半定量的还是定性的。