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昆虫蛋白提取试剂盒

产品货号：26123

产品规格：50T/100T

产品简介：

昆虫组织蛋白提取试剂盒适用于从各种昆虫类细胞、组织中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

产品特点：

1. 使用方便，从昆虫类细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2. 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

3. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
移液器、吸头、离心机及离心管、涡旋振荡器、冰箱，冰盒。

使用方法：

1. 提取液制备：每500μl冷的昆虫蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，4μl蛋白稳定剂，混匀后置冰上备用。

2. 取100mg昆虫组织样本剪碎①，加入昆虫蛋白提取液。

3. 用匀浆机/匀浆器充分匀浆。也可用液氮研磨后加入蛋白提取液。

4. 将匀浆在4℃条件下振荡15-20分钟。
【注】
(1)较低转速保持提取液在晃动即可。
(2)没有振荡条件也可以不振荡，保持静置，稍微延长静置时间，中间每隔几分钟用吸头吹打混匀。

5. 在4℃，12000g条件下离心10分钟。

6. 在上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到昆虫总蛋白。

7. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注：
①用液氮研磨的方法更佳，具体方法可以联系本公司索取详细资料。
②建议用BCA法进行蛋白定量。
③蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

常见问题分析：

1. 蛋白浓度低？

处理部分组织样本时可能没有裂解*，导致蛋白浓度低。只要适当延长提取液的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

2. 用什么方法定量蛋白？

建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为提取液中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

3. 提取时出现胶装沉淀？

蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。

4. 提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

使用注意事项：

1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

5. Western实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubμlin。

6. 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。

注意事项：

1. 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并*清除残留清洁剂。

5. 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

保存条件：

蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白稳定剂、蛋白提取液2-8℃保存。一年有效。