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RIPA裂解液（蛋白类）

产品货号：T16003

产品规格：100ml

保存条件：运输 4℃，*保存-20℃

产品简介：

RIPA裂解液（蛋白类）是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白 样品可以 用于常规的 Western、IP 等。RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。本产品 RIPA 裂解液的主要成分为 50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS 等。

操作步骤：

1. 对于培养细胞样品：

1) 对于贴壁细胞，去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有 干扰， 可以不洗)。按照每 10 7细胞加入 200 微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞 充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。

2) 对于悬浮细胞，离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照每 10 7细胞加入 200 微升裂解液 的比例 加入裂解液。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，可 适量添加裂解液。

3) 充分裂解后，10000-14000rpm 离心 5-10 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和 免疫共沉淀等操作。

2. 对于组织样品：

1) 把组织剪切成细小的碎片。

2) 按照每 20 毫克组织加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添 加更多 的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

3) 用玻璃匀浆器冰上匀浆，直至充分裂解。

4) 充分裂解后，10000-14000rpm 离心 5-10 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和 免疫共沉淀等操作。

5) 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 vortex 使样品裂解充分。 然后同样离心取上清，用于后续实验。

注意事项 ：

1. 裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用 Bradford 法测定蛋白浓度，可以选用本公司 生产的 BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

2. 用户使用前可根据需要加入蛋白酶抑制剂如 PMSF 或者根据需要再加入 leupeptin，aprotinin 等其它抑制剂。

3. 裂解液中 SDS 4℃保存易沉淀析出，使用前应该 37℃-60℃水浴重新溶解*后回复到室温使用。

4. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。