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​人结肠腺癌细胞SW1116​

安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。

若客户收到2ml小管细胞:收到细胞以后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超菌台内，严格无菌操作；然后将小管细胞转移至T25培养瓶，加入5ml左右含FBS的培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞汇合度：若未超过80%汇合度，换液继续培养，根据情况传代或者冻存。若超过80%汇合度，可直接进行传代（细胞贴壁处理方法）。

冻存细胞处理方法：

收到细胞后，检查外包装是否完整，干冰是否完好，细胞冻存管是否完好且未溶解。如有破损、溶解等问题,细胞若不立即复苏，请将细胞置于液氮中保存。若复苏请进行以下操作：

1. 75%酒精喷冻存管后，用干净的纸或酒精棉球擦拭冻存管，放入超净台。

2. 预热细胞*培养基，准备一根新的15mL 无菌离心管和一个无菌的 T25 细胞培养瓶。

3. 将 5ml *培养基添加到 T25 细胞培养瓶，备用。将 5ml *培养基添加到 15ml 离心管中，备用。

4. 准备 37℃水浴，迅速取出细胞，将冻存管放入水浴中快速摇晃使之融化。

5. 融化*后的冻存管酒精棉球擦拭，在超净台中打开冻存管，用 1mL 移液器将细胞悬液取出，加入到准备好的含培养基的离心管中，混匀，放入离心机中， 1200rpm 离心3-5min。

6. 离心停止后取出离心管，小心地弃上清液，加入 1ml *培养基，轻吹打混匀成悬液，全部吸取转移到步骤 3 中准备的 T25 细胞培养瓶中，混匀后放置37℃，5%CO2 培养箱培养。

7. 次日于显微镜下观察细胞状态，视情况可换液或直接传代实验。

复苏细胞一般采用快速融化法，以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。

注：收到细胞后请及时处理，一周内发现细胞异常，请及时联系，并提供相关图片及说明！

贴壁细胞的传代:对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml*培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入*培养基后继续培养或实验。悬浮细胞的传代:一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入*培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入*培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入*培养基继续培养。

1.打开水浴锅, 预热到３７度

2.从液氮罐中出冻存的细胞，迅速放入３７度水浴锅　快速溶解

3.在超净台中，把溶解的细胞移入离心管，（离心管内先加入２ＭＬ左右的培养基）．１０００ＲＰＭ　离心５分钟

4.弃上清，加入１ＭＬ培养基，吹打均匀，移入培养瓶内，（培养瓶内先加入４－５ＭＬ培养基）３７度过５％ＣＯ２培养箱培养　　

细胞冻存

１．将细胞消化下来，移入离心管离心，弃上清

２．准备冻存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培养基＋１０％ＤＭＳＯ（现用现配）

３．加１．５冻存液在离心管中，将细胞吹打均匀，移入冻存管内．

放入－２０度冰箱２－４小时后．再放入－８０度冰箱过夜，第二天放入液氮罐保存。

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