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目录:合肥恩派尔贸易有限公司>>Abnbio感受态细胞>>克隆 (电击) 感受态细胞>> EPI400Electroporation克隆 (电击) 感受态细胞

Electroporation克隆 (电击) 感受态细胞
  • Electroporation克隆 (电击) 感受态细胞
参考价 2160
订货量 ≥1
具体成交价以合同协议为准
2160
≥1
具体成交价以合同协议为准
  • 品牌 Abnbio
  • 型号 EPI400
  • 厂商性质 经销商
  • 所在地 合肥市
属性

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更新时间:2024-03-25 11:04:29浏览次数:49评价

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供货周期 现货 规格 20支50ul
货号 ABD311-20 应用领域 化工,生物产业,制药
主要用途 细胞培养
EPI400 Electroporation-Competent Cell/ Electroporation克隆 (电击) 感受态细胞
保存条件:-80℃

EPI400 Electroporation-Competent Cell 克隆 (电击) 感受态细胞

基因型:

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL(StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

简要说明:

EPI400 电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。该菌株来源于 EC100菌株,将 EC100 核基因中控制质粒拷贝数的 pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的 pcnB基因,即是EPI400 菌株。 EPI400 菌株可以降低质粒的拷贝数,特别适合于各种不稳定DNA 或毒性基因的克隆,在加入诱导剂CopyCutterInductionSolution后又可以提高质粒产量到正常状态。 [mcrA, Δ(mrrhsdRMS-mcrBC)]基因型使 EPI400 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。 recA1 和endA1 的突变有利于插入DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。lacZΔM15 标记的存在使 DH10B可用于蓝白斑筛选,tonA 赋予其抗噬菌体T1和 T5的能力,rpsL赋予其来lian霉素抗性。

操作说明:

一、0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5分钟,待其沥干水分,正置 5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面 0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置 5分钟充分降温。

二、取-80℃保存的TOP-10电击感受态细胞插入冰中5 分钟,待其融化,加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手bo打EP 管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19;  B. 对于连接产物,请用乙醇沉淀DNA 后加入适量 TE缓冲液(10mM TrisHCl, pH7.5;1mM EDTA)重悬,DNA 浓度不超过100ng/μl,体积不超过 5μl/50μl 感受态。

三、用200 μl枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。

四、启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8kV(此为 BioRad 电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。

五、2分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入 700 μl不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基(室温),用1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到 50ml 离心管(BD Falcon50ml锥形离心管等),向离心管中补加S.O.C. 培养基至 5ml。37℃,225rpm 复苏60 分钟。

六、5000rpm离心一分钟收菌,重悬后取 100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C 平板上(因菌量较大,若全部涂板请选用直径 15cm培养皿2-5 个)。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养13-17 小时。

注意事项:

(一)加入DNA 时体积不应大于感受态体积的1/10。

(二)电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。

(三)当DNA 不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。

(四)电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

(五)若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

(六)对于连接产物转化, 最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液 (10 mMTrisHCl,pH7.5;1 mMEDTA)重悬产物,保证DNA 浓度不超过 100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。

(七)混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖0.6cm)避免用力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

(八)电击感受态细胞最好保存在-80℃以下,高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。









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